[发明专利]一种快速培养金黄色葡萄球菌的方法

说明书

本发明公开了一种快速培养金黄色葡萄球菌的方法，属于酶制剂技术领域。本发明是向每100mL水中加入10～14g牛肉浸粉，加入氨肽酶和中性蛋白酶进行酶解，以酶解的产物进行冻干后配成培养基，对金黄色葡萄球菌进行培养。该方法处理下的培养基中多肽分子量小于500的占总量的75.48％，能够有效促进金黄色葡萄球菌的生长，缩短培养周期，使金黄色葡萄球菌的培养周期缩短将近9～15h。

技术领域

本发明涉及一种快速培养金黄色葡萄球菌的方法，属于酶制剂技术领域。

背景技术

牛肉原料酶解产物作为氮源存在于多种培养基中，如普通培养基、检测培养基和发酵培养基等。这类氮源有两种形式，一种是膏状的，但膏状物存在溶解性差，称量费劲并且伴随浪费严重，因此牛肉浸粉因为具备溶解性好，方便使用等优点得到比较多的应用。国内外的牛肉浸粉因为原料和生产工艺的不同在质量上差别还是比较大。牛肉浸粉应用面很宽，对国产牛肉浸粉通过酶解改善其多肽和氨基酸的成分及比例，找出提升其品质的一些规律，在相关行业有重要的学术和应用意义。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是兼性厌氧的革兰氏阳性菌，是医院获得性感染中最常见和食源性疾病的病原体之一。金黄色葡萄球菌毒素和毒力蛋白酶通常在宿主血管中循环导致危及生命的疾病，病原体通常在开放性伤口和尿道中生长，从轻微的皮肤感染到危及生命的疾病如脓肿，肺炎，脑膜炎，心内膜炎和败血病。金黄色葡萄球菌可以生活在恶劣的环境中，容易污染冷冻食品、水等物品，在每个国家，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占的比例较大，成为世界性的公共卫生问题。因此，尽可能缩短检测时间，尽早检测和鉴定出金黄色葡萄球菌，对于公共卫生和食品安全的监测和控制具有重要的意义。现有的检测方法通常将培养的金黄色葡萄球菌的菌液稀释10⁴倍后，涂布在培养基上进行菌落计数，然而受到金黄色葡萄球菌的生长周期的限制，通常要24h后才能对菌落进行计数。

发明内容

为解决现有技术检测周期长的问题，本发明的第一个目的是提供一种快速培养金黄色葡萄球菌的方法，是向含有牛肉浸粉的溶液中同时加入氨肽酶和蛋白酶进行酶解，以酶解后的溶液作为培养基成分对金黄色葡萄球菌进行培养。

在本发明的一种实施方式中，所述培养基中还含有NaCl、蛋白胨。

在本发明的一种实施方式中，所述培养基中，酶解前的牛肉浸粉、NaCl和蛋白胨的质量比为：8～12:1:3～5。

在本发明的一种实施方式中，所述酶解是按200U/g牛肉浸粉的加酶量加入氨肽酶，和/或按0.44～1.5×10⁴U/g牛肉浸粉的加酶量加入中性蛋白酶。

在本发明的一种实施方式中，所述酶解是对浓度为100～140g/L牛肉浸粉溶液进行酶解。

本发明的一种实施方式中，所述氨肽酶添加量为200U/g牛肉浸粉。

本发明的一种实施方式中，所述中性蛋白酶添加量0.44～1.5×10⁴U/g牛肉浸粉。

本发明的一种实施方式中，所述酶解是在40℃～50℃下进行。

本发明的一种实施方式中，所述酶解时间为1～5h。

本发明的一种实施方式中，所述酶解pH为7.5～8.0。

本发明的一种实施方式中，所述培养金黄色葡萄球菌在培养前经过活化，所述活化培养基LB成分为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L。

在本发明的一种实施方式中，所述培养是在36～38℃培养10～42h。

在本发明的一种实施方式中，所述牛肉浸粉的浓度为120g/L，氨肽酶添加量200U/g底物，中性蛋白酶添加量2.5×10⁴U/g底物，反应温度50℃，pH7.5，反应时间1h。