[发明专利]一种枸杞多糖精制的方法

说明书

技术领域

本发明属于枸杞多糖分离纯化技术领域，具体涉及一种枸杞多糖精制的方法。

背景技术

枸杞属茄科，主要分布于我国西北地区，已用作传统中药超过2000多年，目前在东亚、欧洲、北美和国内广泛作为功能性食品，市场份额大。研究表明，枸杞子富含多种活性成分，其中包括18种氨基酸(8种人体必须氨基酸)、21种微量元素、黄酮、蛋白、多糖、类胡萝卜素等。

枸杞多糖是枸杞子最主要的活性成分之一，具有多种生物活性如降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、抗疲劳等，同时还具有免疫调节活性，如促进T细胞、B细胞增值，能够促进NO等细胞因子产生。自然界中的活性多糖大多属于鼠李糖半乳聚糖型、阿拉伯聚糖型、阿拉伯半乳聚糖型和果胶类多糖等类型。多糖的理化性质和结构决定了其生物活性，而理化性质和结构受其提取和分离纯化方法的影响，因此枸杞多糖的提取分离纯化工艺对枸杞多糖的生物活性尤为重要。

现有技术中，枸杞多糖主要是通过水提醇沉透析冷冻干燥得枸杞粗多糖，枸杞粗多糖经阴离子交换柱层析，凝胶过滤柱层析等复杂过程才能得到纯度较高的枸杞多糖，收率低，且易丢失活性多糖组分，难以全面评价枸杞多糖的功能。

发明内容

本发明提供的一种枸杞多糖精制的方法，解决了现有技术的枸杞多糖分离纯化方法操作复杂，得率低，容易丢失活性组分，难以全面评价枸杞多糖的功能的问题。

本发明的第一个目的是提供一种枸杞多糖精制的方法，包括以下步骤：

步骤1，枸杞多糖的提取

步骤1.1，将枸杞子粉碎后，室温浸泡于相当于枸杞子重量3倍体积的蒸馏水中，浸泡24h，离心，收集上清液，浓缩，向浓缩液中加入无水乙醇沉淀，离心，收集沉淀物；

步骤1.2，向所述沉淀物中加入蒸馏水，得到复溶液；然后向复溶液中加入相当于复溶液1/5体积的Sevage试剂，300r/min搅拌15min，离心，收集上清液；

步骤1.3，重复步骤1.2的操作数次直至无沉淀，将最后一次上清液用玻璃纸透析，收集袋内溶液，冷冻干燥，得到枸杞粗多糖；

步骤1.4，将枸杞粗多糖用蒸馏水复溶后，再用截留分子量为8-14KDa的透析袋透析，收集透析袋内透析液，离心，收集上清液冷冻干燥，得到大分子枸杞多糖；收集透析袋外溶液，浓缩冷冻干燥，得到小分子枸杞多糖；

步骤2，大分子枸杞多糖的精制

将大分子枸杞多糖配成水溶液，加入无水乙醇，使乙醇的体积分数为30％，沉淀12h，离心收集第一次多糖上清液和第一次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加蒸馏水复溶，离心，收集的上清液经冷冻干燥，得到初级纯化的第一个枸杞多糖组分；

接着向第一次多糖上清液中加入无水乙醇，使乙醇的体积分数为50％，沉淀12h，离心收集第二次多糖上清液和第二次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加蒸馏水复溶，离心，收集的上清液经冷冻干燥，得到初级纯化的第二个枸杞多糖组分；

继续向第二次多糖上清液中加入无水乙醇，使乙醇的体积分数为70％，沉淀12h，离心收集第三次多糖沉淀，向第三次多糖沉淀中加蒸馏水复溶，离心，收集的上清液经冷冻干燥，得到初级纯化的第三个枸杞多糖组分；

将初级纯化的第一、二、三个枸杞多糖组分分别经Sephadex G-100柱层析分离纯化，分别得到第一、二、三个高纯度枸杞多糖。

优选的，上述的枸杞多糖精制的方法，步骤1.1、步骤1.2、步骤1.4和步骤2中离心条件均为8000r/min离心10min。

优选的，上述的枸杞多糖精制的方法，步骤1.1的具体操作为：将枸杞子粉碎后，加入相当于枸杞子重量3倍体积的蒸馏水，混匀，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.0，浸泡24h，8000r/min离心10min，收集第一次上清液和第一次沉淀；向第一次沉淀中加入相当于枸杞子重量1.5倍体积的蒸馏水，浸泡6h，8000r/min离心10min，收集第二次上清液；合并第一次上清液和第二次上清液，并将其浓缩；然后向浓缩液中加入相当于浓缩液4倍体积的无水乙醇，沉淀12h后，8000r/min离心10min，收集沉淀物。

优选的，上述的枸杞多糖精制的方法，所述Sevage试剂由二氯甲烷与正丁醇按照4:1的体积比例混合而成。