[发明专利]测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法

权利要求书

1.测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法，其特征在于包括如下步骤：

1)肠内菌的制备：取粪便，在无菌无氧操作条件下，将粪便放入到一个充满氮气的自封袋中，使粪便均质化，然后放入到灭菌完毕的GAM培养基中，轻轻振摇，置无菌厌氧恒温培养箱中，在37℃下培养24h；

2)芍药苷的肠内菌转化：在无菌厌氧培养箱中，向培养的肠内菌中加入芍药苷，然后放置在37℃恒温摇床上振摇，速度为100r/min，培养2-24h，取出，加入乙酸乙酯终止反应，得芍药苷的肠内菌代谢产物；

3)样品处理：采用萃取液萃取芍药苷的肠内菌代谢产物三次，合并有机相，旋转蒸干，再用甲醇转移至EP管中，过0.22μm微孔滤膜，获得代谢产物样品；

4)样品测定：具体条件如下：

色谱条件：色谱柱：Dikma Diamonsil^TMODS C₁₈色谱柱；

洗脱时间：t＝50min；

进样量：10μL；

检测波长：λ＝230nm；

柱温：30℃；

流速：0.5mL/min；

流动相：水+甲醇，采用梯度洗脱，程序如表1所示；

表1

时间min	流速mL/min	水％	甲醇％
0	0.5	85	15
10	0.5	70	30
20	0.5	60	40
35	0.5	0	100
50	0.5	0	100

质谱条件：一级质谱：电离模式：电喷雾电离ESI；

扫描模式：正离子扫描；

电喷雾电压：4.0bar；

干燥气流速：10L/min；

干燥气温度：200℃；

二级质谱：电离模式：电喷雾电离ESI；

扫描模式：正离子扫描；

碰撞气：氮气；

毛细管电压：2.8kV；

锥孔电压：3.0V；

源温度：110℃；

脱溶剂温度：350℃；

脱溶剂气体流量：50L/Hr；

碰撞能量：15-35eV。