[发明专利]一种油气微生物勘探方法

权利要求书

1.一种油气微生物勘探方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)在勘探区内设置采样点平面矩阵，结合勘探区地形和平面矩阵确定采样点的坐标；

(2)采集样品，样品的采样量为10-100g，采样深度为20-60cm，所采集的样品在0至-20℃保存和运输；

(3)利用选择性培养基通过微生物培养法检测丁烷氧化菌的含量，绘制等值线，确定丁烷氧化菌培养异常区，通过选择培养法检测丁烷氧化菌的含量，先采用以丁烷为唯一碳源的液体培养基进行富集，再以丁醇为唯一碳源的固体平板通过平板稀释法检测样本中丁烷氧化菌的含量，所述选择性培养基中包括K₂HPO₄ 1.75g，KH₂PO₄ 0.96g，NaNO₃ 2.0g，MgCl₂0.1g，(NH4)₂SO4 0.1g，微量元素0.2mL，pH为7.2；其中每升微量元素中含有CaCl₂ 5.54g，ZnCl₂ 5.3g，MnCl₂ 5.06g，FeSO₄ 4.99g，(NH₄)₆Mo₇O₂₄ 1.10g，CuSO₄ 1.57g，CoCl₂ 1.61g；

(4)对丁烷氧化菌培养异常区的样本进行实时荧光定量PCR检测，所述实时荧光定量PCR针对低级烃氧化菌的特异性保守区或功能区进行检测，采用SYBR Green I荧光染料进行定量，所述低级烃氧化菌包括甲烷氧化菌、乙烷氧化菌和丙烷氧化菌；

(5)根据实时荧光定量PCR的结果，选择候选勘探区；

(6)在微生物培养结果、荧光定量PCR结果的基础上，结合地表温度、土壤岩性、土壤pH值、土壤盐度、地表植被等因素，确定井位候选点；

其中：不使用微生物培养法检测甲烷氧化菌、乙烷氧化菌和丙烷氧化菌的含量，并且不使用实时荧光定量PCR检测丁烷氧化菌的含量。

2.如权利要求1所述油气微生物勘探方法，其特征在于步骤(1)中勘探区域内平面矩阵的网格密度为200-500m×100-250m。

3.如权利要求1所述油气微生物勘探方法，其特征在于步骤(2) 中采样深度为40cm，所采集的样品在-20℃保存和运输。

4.如权利要求1所述油气微生物勘探方法，其特征在于所述以丁烷为唯一碳源的富集方法如下：在无菌操作台上称取1g土壤样品置于盛有50mL液体培养基的150mL三角瓶中，向培养基液面以下充入丁烷气使培养液中丁烷气达到饱和，并使三角瓶中的气体空间充满丁烷气，封口，180rpm 28℃震荡培养7d。

5.如权利要求1所述油气微生物勘探方法，其特征在于所述以丁醇为唯一碳源的固体平板中含有5％的丁醇作为碳源。

6.如权利要求1所述油气微生物勘探方法，其特征在于步骤(4)中荧光定量PCR检测针对的靶基因为低级烷氧化酶基因。

7.如权利要求6所述油气微生物勘探方法，其特征在于检索GenBank数据库中各低级烷氧化酶基因序列，进行多重比对，针对保守区序列设计荧光定量PCR引物。