[发明专利]癌关联物质的拉曼定量方法

说明书

本发明提供一种用于测定源自癌细胞的游离DNA的拉曼定量分析方法。一种根据表面增强拉曼散射(SERS)的强度判断癌疾病的方法，其特征在于，包含如下工序：准备具有含有过氧化银的银氧化物的介晶区域的生物芯片，在该生物芯片的介晶区域中滴加血清或生物体试样液，选择性地吸附试样中的具有正电荷的癌关联物质，对吸附的癌关联物质进行激光照射，检知来自其的拉曼散射光。可以在拉曼散射光谱中碳特有的D带及G带中、在甲基特有的2900cm^－1附近作为癌关联物质的特性峰光谱进行检测。

本申请是申请日为2014年05月08日、申请号为201480035721.4、发明名称为“癌关联物质的拉曼定量方法”的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种癌关联物质的拉曼定量方法，其以伴随癌的恶化而增加的血中的癌关联物质、主要是游离DNA为对象。

背景技术

目前，作为癌的诊断方法之一，可使用检测伴随癌的恶化而在血液中出现、增加的癌关联物质的方法。在此，癌关联物质为从癌患者的体液中所提取的癌特有物质，一般是指在癌化的细胞被破坏的情况下游离于血液中的、源自该被破坏的癌细胞的蛋白质等。而且，在现有的癌的诊断方法中，在血液中的癌关联物质的定量值为某种一定值以上的情况下，判定为受验者存在患有癌的可能性。

作为因这样癌化的细胞的破坏等而游离于血液中的癌关联物质，已知有不仅蛋白质、而且DNA也同样地游离。而且，报道有在健康人和癌患者中进行比较时，就血液中的源自癌细胞的游离DNA(ctDNA)的量而言，与健康人相比，癌患者的一方显著地多。因此，认为通过将血液等的体液中的源自癌细胞的游离DNA进行定量，可以诊断受验者是否患有癌，作为这种癌的诊断方法，例如提出了：通过聚合酶连锁反应(PCR)法等扩增的200bp以上的DNA在被排出至体液或体外的糞便中等被检出时，诊断为受验者存在患有癌的可能性，进一步分析其DNA的变异的方法(专利文献1)；将体液等中所含的源自细胞残渣的基因组DNA进行定量，在其值为某种一定值以上的情况下，进一步进行DNA检査的方法(专利文献2)。

但是，即使通过诊断而判明患有癌，仅将体液中的DNA进行定量，还不能特定癌产生的脏器。而且，已知有在癌产生的情况下，根据其产生的脏器而产生特异的DNA的变异。因此，通过明确DNA的变异的种类，存在可以特定癌产生的脏器的可能性。在此，作为DNA的变异，可列举：DNA的点突变、染色体的缺失或扩增等结构异常。例如，已知有胰腺癌的约7成在K-ras基因中产生点突变。另外，在异质接合的缺失(Loss of heterozygous、以下，简称为LOH)的分析中，也报道有在各癌种中特异的染色体臂的缺损，例如在肺癌中，已知有在3号染色体的短臂上LOH集中。另外，在乳癌中，已知有8号染色体的长臂的扩增或RB2的扩增。因此，为了提供将源自癌细胞的DNA进行定量而高精度地进行癌的诊断的方法，提出了包含从受验者中采取的血浆提取游离DNA的工序、将提取的游离DNA进行定量而算出每单位体积血浆的游离DNA的工序、将算出的游离DNA的算出值与第1阈值以上的第2阈值进行比较的工序、和在算出值低于第1阈值的情况下，判定为受验者的患有癌可能性高，另一方面，第2阈值以上的情况下，源自正常细胞的DNA混入于血浆中的癌的诊断方法(专利文献3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:美国专利第6143529号说明书

专利文献2:美国专利2004/0259101A1号说明书

专利文献3:国际公开2008/090930号

专利文献4:日本特开2011-81001号公报

发明内容

发明所要解决的课题