[发明专利]一种提高羊肚菌母种制做成功率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物学研究领域，更具体的是涉及一种提高羊肚菌母种制做成功率的方法。

背景技术

羊肚菌是一种珍稀食用菌品种,因其菌盖表面凹凸不平、状如羊肚而得名。羊肚菌(Morchella)，又名草笠竹，是一种珍贵的食用菌和药用菌。羊肚菌于1818年被发现。用于食积气滞、脘腹胀满、痰壅气逆喘咳。羊肚菌又称羊肚菜、羊蘑。其结构与盘菌相似，上部呈褶皱网状，既像个蜂巢，也像个羊肚，因而得名。羊肚菌在山火之后的两至三年内产量特高，因此北美的采摘者会根据山火来采集羊肚菌。然而，当火灾被控制后，在同一个地区内，它的生长数量会年复一年地减少。

近年来，随着羊肚菌产业被越来越多的人的了解和关注，也随着种植技术越来越完善，因此有许多企业或者个体户加入到了羊肚菌种植行业，为了缩减自己的种植投入成本，许多企业或者个体户想自己生产羊肚菌菌种，可是却往往在羊肚菌母种生产的这个环节中就失败了，他们在制作母种的过程中，(1)会存在接入试管的羊肚菌子实体小块不萌发的情况，现有的作羊肚菌母种过程中是：在无菌环境下用手术刀把整个羊肚菌子实体切割，留取菌柄部分，把菌柄纵面用手术刀划开，菌柄内部中空，划开后的菌柄内侧和外侧都用75％的酒精棉擦拭进行杀菌处理，酒精擦拭后用手术刀切下0.2厘米平方的羊肚菌子实体组织块放入培养皿中心位置，封口后放入生化培养箱23—25度培养3天，在这样的制作母种操作方式下，会导致接入的组织块不萌发，因为酒精擦拭消毒的过程在杀死其它杂菌的同时也会杀死羊肚菌的组织块，使接入培养皿的羊肚菌组织块失去活性，直接导致制作失败；

(2)还会出现接入到试管的羊肚菌子实体组织块萌发出了菌丝体，但是却不单是羊肚菌菌丝还有其他杂菌菌丝，羊肚菌菌丝和杂菌菌丝生长在一起后，就很难把它们单独分离出来了，在生产第一步就失败了，他们的母种制作成功率通常只有1％或更低。

发明内容

本发明的目的在于：为了解决现有羊肚菌母种制纯成功率低的技术问题，本发明提供一种提高羊肚菌母种制做成功率的方法。

本发明为了实现上述目的具体采用以下技术方案：

一种提高羊肚菌母种制做成功率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1、培养基的准备：制作母种培养基，母种培养基经过高压灭菌、冷却和凝固后放入培养皿中，然后在把培养皿放入放入超净工作台备用；

2、接种工具的准备：包手术刀等各种接种工具放入放入超净工作台备用；

3、子实体的准备：把准备好的羊肚菌新鲜子实体放入超净工作台，紫外线杀菌20～30分钟后备用；

4、培养：在无菌环境下，用步骤2中的手术刀把步3中的整个羊肚菌切割，留取菌柄部分，把菌柄用手术刀划开，取菌柄内侧长度为0.2厘米的组织块放入步骤1中的培养皿中心位置，培养皿封口后放入生化培养箱12℃～18℃下培养3～4天，组织块四周长出菌丝，当培养皿里羊肚菌组织块周围的菌丝长0.8cm～1cm时，进行下一步提纯；

5、菌丝提纯：把经过步骤4的培养皿放入超净工作台，把其他接种工具放入超净工作台，开启紫外线灯杀菌20～30分钟后关闭，打开超净工作台其它工作模式，把培养皿里羊肚菌组织块周围的菌丝长接入凝固试管培养基斜面的中心位置后，用硅胶塞把试管口封严后放人生化培养箱12℃～18℃下培养，观察长满的菌丝体是否是羊肚菌的菌丝，从而得到羊肚菌母种。

进一步地，在步骤4中，当培养皿里羊肚菌组织块周围的菌丝长1cm时，进行下一步提纯。

进一步地，步骤1中母种培养基的配方为步骤1中母种培养基的配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，蛋白胨5克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，水1000毫升。

羊肚菌母种培养基的配制方法：称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，将马铃薯滤液重新加入到锅中，补水至1000ml,继续加热沸腾后加入20g琼脂，继续文火煮沸至琼脂完全溶解后再次补水至1000毫升，在琼脂溶解后加入葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，蛋白胨5克。分装试管，每试管约5-10ml，视试管大小而定，把分装好的塞好硅胶塞的试管放入手提式高压锅内灭菌，灭菌过程中先首排净高压锅内冷空气，待温度升至122-124度时开始计时，30分钟后灭菌结束，取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。

本发明的有益效果如下：