[发明专利]一种不含外源性添加剂的富血小板血浆制备方法

说明书

本发明涉及一种不含外源性添加剂的富血小板血浆制备方法。本发明所述的富血小板血浆制备方法包括以下步骤：样品准备：将静脉血全血加入已预冷的离心管中；第一次离心：对静脉血全血进行第一次离心，180g，10分钟；第二次离心：转移血浆层至新的离心管内，配平，进行第二次离心，1550g，10分钟；离心后弃去血浆上清液，保留占静脉血全血体积的1/10的血浆上清液，重悬血小板沉淀，即制备得到所述的富血小板血浆；其中，所有操作均在低温下进行。本发明使用物理的温度控制调节血液的抗凝及血小板激活，避免了抗凝剂及促凝剂的加入，避免因外源性物质加入导致的临床不良反应，保证了富血小板血浆临床使用的安全性。

技术领域

本发明属于血液制品技术领域，涉及一种不含外源性添加剂的富血小板血浆制备方法。

背景技术

富含血小板血浆(Platelet-rich plasma，PRP)特指含有4-5倍正常人体血小板浓度的自体血浆。血小板是巨核细胞的胞质片段，属于白细胞范畴，在骨髓中形成。它们缺乏细胞核，但是包含细胞器，还有线粒体，微管，以及α、δ、λ微粒这些结构。其中，α颗粒包含有多种生长因子，包括：血小板源性生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转换生长因子(TGF-β)等。PDGF能促进巨噬细胞活化和血管生成，促进成纤维细胞增殖活性和趋化作用，增加胶原蛋白的合成，促进骨细胞的增殖。FGF能促进细胞外基质的增生，增强成纤维细胞的增殖活性，刺激I型胶原合成和诱导骨基质沉淀。TGF-β有可能抑制破骨细胞的形成和骨吸收，从而有利于骨形成。IGF是成纤维细胞趋化剂并刺激胶原蛋白合成。另外它通过骨增殖和成骨分化促进骨形成。VEGF在血管的形成过程中扮演重要的信号蛋白角色。在体外，VEGF已被证实能刺激内皮细胞有丝分裂和细胞迁移，能扩张血管，增加微血管渗透性。EGF通过与表皮生长因子受体结合，引发某些基因的表达，最终促进DNA合成增加和细胞的增殖。由于PRP具有上述诸多的作用，故已被广泛应用于皮肤科、骨科、颌面外科和整形外科等诸多领域。

目前，国内外关于PRP的制备方法及已上市的成商品化PRP提取装置众多，用不同的方法制备的PRP，所获取的血小板浓度和活性不一，但首先均需要进行血液抗凝处理。目前常用的获FDA及CFDA批临床提取PRP常用的抗凝剂为ACD-A(主要成分为枸橼酸钠)。此外，当PRP在体外应用或将PRP做止血剂或组织包埋的媒介时，都必须应用激活剂，即体外激活血小板。最常用的体外激活方法是添加10％氯化钙和凝血酶启动凝血过程，可以得到PRP凝胶和释放物，再经过快速离心后就可得到生长因子。

虽然现有技术制备的PRP具有一定的临床应用价值，但是其存在的抗凝剂及促凝剂等外源性添加剂仍存在一定程度上的缺陷，如：1)枸橼酸钠会引起血小板聚集，同时在一定程度上会破坏血小板，从而影响血小板计数，无法准确获得具有临床意义上的PRP，高浓度枸橼酸钠可引起枸橼酸钠中毒反应，其与血液中的钙离子结合使血钙降低，从而表现出手足抽搐、出血倾向、血压下降、心率缓慢甚至心跳骤停；2)凝血酶不良反应，在体外凝血酶的浓度可影响细胞的增殖、组织因子及炎症因子的释放，高浓度时具有神经毒性，抑制细胞的增殖，甚至引起脑细胞死亡。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于提供一种不含外源性添加剂的富血小板血浆制备方法，该方法通过单纯调控温度制备出高浓度的富血小板血浆，不需添加外源性抗凝剂或促凝剂，确保富血小板血浆临床使用的安全性及有效性。

技术方案

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：