[发明专利]一种控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法

权利要求书

1.控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、外植体选择及预处理：以3～4月挖取的太白贝母新鲜鳞茎为外植体，去掉外层腐烂、褐化的鳞片，切除根系；洗净鳞茎表面，洗衣粉溶液中浸泡4～6min，擦拭鳞茎表面，流水冲洗0.8～1.2h，再用去离子水冲洗4～6次，滤纸吸干，备用；

S2、外植体消毒处理：将S1处理后的外植体，浸没在浓度为0.08～0.12%的氯化汞溶液中，搅拌，于超净工作台中，漂洗，干燥，备用；

S3、小鳞茎诱导分化：将S2得到的无菌外植体，用灭过菌的镊子将其鳞片掰开，再用无菌刀片纵切鳞片得2～4mm宽的条状小块，将小块接种于培养基上培养；

S4、继代培养：将S3步骤的培养的小鳞茎在相同培养基上，每20天继代培养一次，共继代培养3次；

S5、小鳞茎增殖培养：将S4得到的生长旺盛的健康小鳞茎，转移至不添加任何灭菌剂的培养基上增殖培养85～95d；

所述S3步骤中培养温度为18～22℃，相对湿度为75～85%，光照强度为1000～1500Lx，光照时间为11～13h；

S3、S4步骤中所述培养基的pH值为5.6～5.8；是由MS基本培养基+3.0～5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.8～1.2mg/L的α-萘乙酸+4.0～6.0mg/L的青霉素+0.8～1.2g/L的多菌灵+3%蔗糖+9g/L琼脂组成。

2.根据权利要求1所述控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法，其特征在于，S1步骤中所述洗衣粉溶液是由洗衣粉与水按照重量体积比0.8～1.2g:1000mL配置而成。

3.根据权利要求2所述控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法，其特征在于，S1步骤中所述洗衣粉溶液是由洗衣粉与水按照重量体积比1.0g:1000mL配置而成。

4.根据权利要求1所述控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法，其特征在于，所述S2步骤中搅拌采用磁力搅拌器搅拌，搅拌时间为6～8min，搅拌速度为150～200r/min。

5.根据权利要求1所述控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法，其特征在于，所述S2步骤中漂洗为用无菌水漂洗3～5次，每次漂洗时间为3～5min；干燥为用无菌滤纸吸干。

6.根据权利要求1所述控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法，其特征在于，所述S3步骤中培养温度为20℃，相对湿度为80%，光照强度为1000～1500Lx，光照时间为12h。

7.根据权利要求1所述的控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法，其特征在于，所述诱导培养基是由MS基本培养基+4.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+1.0mg/L的α-萘乙酸+5.0mg/L的青霉素+1.0g/L的多菌灵+3%蔗糖+9g/L琼脂组成。

8.根据权利要求1所述控制太白贝母组织培养内生菌污染的方法，其特征在于，S5步骤中所述培养基是由MS基本培养基+3.0～5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.8～1.2mg/L的α-萘乙酸+3%蔗糖+9g/L琼脂组成。