[发明专利]萃取水体中二苯乙烯类雌激素残留的方法

权利要求书

1.一种萃取水体中二苯乙烯类雌激素残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：利用不锈钢棒为原材料，制备免疫亲和棒；

S2：采用二苯乙烯类雌激素萃取液测定所述免疫亲和棒的柱容量；

S3：采用所述免疫亲和棒萃取水体中残留的二苯乙烯类雌激素。

2.根据权利要求1所述的萃取水体中二苯乙烯类雌激素残留的方法，其特征在于，所述S1具体包括如下步骤：

S101：将不锈钢棒的一端浸入浓盐酸溶液中刻蚀25min～30min，然后用去离子水冲洗，再于130烘干1h，然后冷却；其中，所述浸入的长度为1.0cm～3.0cm；

S102：将冷却后且刻蚀过的不锈钢棒的一端蘸取硅酸钾溶液，然后粘附5μm的硅胶颗粒，使不锈钢表层被硅胶颗粒均匀覆盖；再将不锈钢棒粘附硅胶部分置于浓硝酸的瓶口烟熏15s，然后在室温下干燥15h；其中，所述硅酸钾溶液的质量分数为30％；

S103：去除经过S102处理后的不锈钢棒中的水分；

S104：将经过S103处理后的不锈钢棒的附有硅胶的一端浸入含APTES的乙醇水溶液中，室温摇晃过夜；其中，所述含APTES的乙醇水溶液中，乙醇、超纯水和APTES的体积比为90:5:5，所述摇晃的速率为60r/min；

S105：将经过S104处理后的不锈钢棒依次采用无水乙醇、超纯水和无水乙醇冲洗，然后放入连接有氮气罐的真空抽滤瓶中，抽出所述真空抽滤瓶中空气并充满氮气，并将所述真空抽滤瓶的下半部分浸入80的液体石蜡中，恒温保持10～15h；

S106：将经过S105处理后的不锈钢棒浸入到pH值为8.5的活化剂中，5h后用超纯水冲洗，然后浸入到含单克隆抗体的PBS溶液中，室温摇晃过夜；其中，所述含单克隆抗体的PBS液中，单克隆抗体的浓度为0.5mg/mL，所述摇晃的速率为60r/min；

S107：将经过S106处理后的不锈钢棒浸泡于pH值为8.32的乙醇胺水溶液中，室温摇晃过夜；其中，所述乙醇胺水溶液中，乙醇胺的浓度为0.2mg/mL，所述摇晃的速率为60r/min；

S108：将经过S107处理后的不锈钢棒浸入0.2mg/mL的NaCNBH₃溶液中，4保温48h，得到所述免疫亲和棒。

3.根据权利要求2所述的萃取水体中二苯乙烯类雌激素残留的方法，其特征在于：

所述S103具体包括：将经过S102处理后的不锈钢棒放入干燥箱中，然后逐步升温以除去水分；其中，所述逐步升温包括：先以1/min的速率由50升温至95，之后保温15min，继续以1/min的速度由95升温至150，保温过夜。

4.根据权利要求2所述的萃取水体中二苯乙烯类雌激素残留的方法，其特征在于：

所述S105中，抽出真空抽滤瓶中空气并充满氮气的具体包括：将真空抽滤瓶密封后，用真空泵将密封容器内的空气抽出，关闭真空泵，同时向容器中充入氮气，待泵压恢复为零时，关闭氮气阀同时再打开真空泵再次抽气，如此循环操作5次，保证容器内部的空气均被抽出并充盈氮气后，持续通入氮气。

5.根据权利要求2所述的萃取水体中二苯乙烯类雌激素残留的方法，其特征在于：

所述S106中，所述活化剂包括：1112μL质量分数为25％的戊二醛溶液、10mL 0.1mol/L的碳酸钠溶液和50mmol/L氰基硼氢化钠。

6.根据权利要求1所述的萃取水体中二苯乙烯类雌激素残留的方法，其特征在于，所述S2具体包括如下步骤：

S201：用PBS溶液将二苯乙烯类雌激素配制成浓度为100ng/mL的萃取液；

S202：将所述免疫亲和棒的萃取端插入所述萃取液中，室温摇晃萃取；

S203：将经过S202处理后的不锈钢棒的萃取端插入解吸液中，进行洗脱，收集洗脱液；

S204：将所述洗脱液在50水浴中经氮气吹干后，再用0.6mL流动相液进行复溶，然后用超高效液相色谱串联质谱进行检测，得到不锈钢棒的柱容量。

7.根据权利要求6所述的萃取水体中二苯乙烯类雌激素残留的方法，其特征在于：

所述S202中，所述摇晃的速率为120r/min，所述萃取的时间为30min。