[发明专利]一种慢病毒绿色荧光自噬报告载体及构建方法

权利要求书

1.一种慢病毒绿色荧光自噬报告载体，其特征在于，包含氨苄青霉素抗性、嘌呤霉素筛选标记和绿色荧光自噬标记蛋白LC3基因序列。

2.根据权利要求1所述的一种慢病毒绿色荧光自噬报告载体，其特征在于，所述的绿色荧光自噬标记蛋白LC3基因序列如SEQ.ID.NO.1所示。

3.权利要求1或2所述一种慢病毒绿色荧光自噬报告载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)根据绿色荧光自噬标记蛋白LC3基因序列信息，设计并合成引物，以pEX-GFP-hLC3WT载体质粒为模板，PCR扩增获得绿色荧光自噬标记蛋白LC3基因序列；

(2)根据绿色荧光自噬标记蛋白LC3基因序列和pLenti-puro序列，用BamHI和XhoI酶切绿色荧光自噬标记蛋白LC3基因的PCR产物和pLenti-puro载体质粒，将酶切产物连接，获得目的载体pLenti-puro-GFP-LC3；

(3)无内毒素提取验证载体pLenti-puro-GFP-LC3质粒，用BamHI和XhoI酶切载体pLenti-puro-GFP-LC3质粒，核酸电泳检测基因序列大小，同时将载体pLenti-puro-GFP-LC3质粒测序验证序列是否与预期一致；

(4)用载体pLenti-puro-GFP-LC3质粒转染Hep2细胞,48h后激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3的表达情况。