[发明专利]鉴别无蜡粉不结球白菜的引物、试剂盒及鉴别方法有效
| 申请号： | 201710549794.0 | 申请日： | 2017-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN107312845B | 公开（公告）日： | 2020-11-03 |
| 发明（设计）人： | 万正杰;王灿洁;杨庆勇;夏军辉;李艺潇;姚培杰;刘旭佳 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴别 无蜡粉不结球 白菜 引物 试剂盒 鉴别方法 | ||
1.一种用于鉴别无蜡粉不结球白菜的引物，其特征在于，包括：
BrCER1-SF：5’-CTACCATTCCCACCACCAC-3’；
BrCER1-SR：5’-GAAAGACGCTATGGATGCCG-3’。
2.含有权利要求1所述引物的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括Tris-HCl、(NH4)2SO4、MgCl2、Triton X-100、dNTPs、Taq酶和模板DNA。
4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括10mmol/L Tris-HCl、10mmol/L (NH4)2SO4、10mmol/L MgCl2、0.1% Triton X-100、0.2mmol/L dNTPs、0.5UTaq酶和100ng 模板DNA。
5.一种鉴别无蜡粉不结球白菜的方法，其特征在于，包括：
（1）提取不结球白菜植株样品的DNA；
（2）以步骤（1）提取的DNA为模板，利用权利要求1所述引物对所述不结球白菜植株样品进行PCR扩增；
（3）分析PCR产物；
所述不结球白菜植株样品为白菜13S106或白菜13S126。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）具体为：
播种不结球白菜植株样品于穴盘中，在苗期采用CTAB法提取DNA。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述CTAB法中CTAB的浓度为0.8%。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，PCR扩增体系包括：以10μL计，10mmol/L Tris-HCl、10mmol/L (NH4)2SO4、10mmol/L MgCl2、0.1% Triton X-100、0.2mmol/L dNTPs、0.5U Taq酶、100ng 模板DNA、10ng 引物BrCER1-SF和10ng BrCER1-SR。
9.根据权利要求5-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中PCR反应条件为：94℃预变性1min后，94℃反应30s，55℃反应30s，72℃反应1min， 共30个循环；最后在72℃延伸8min。
10.根据权利要求5-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）具体为：
将PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳、EB染色后，应用凝胶图像分析系统记录；统计带型，鉴别出aa基因型无蜡粉不结球白菜。
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