[发明专利]一种低分子量泡叶藻聚糖的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种低分子量泡叶藻聚糖的制备方法及其应用，其方法为采用纤维素酶水解泡叶藻聚糖，得到不同分子量片段的泡叶藻聚糖水溶液，再通过超滤膜分离得到低分子量泡叶藻聚糖。本发明的酶法制备低分子量泡叶藻聚糖生产工艺的反应条件温和，可控性强，制备出的低分子量聚糖片段具有很好的免疫诱导活性。将制备的低分子量泡叶藻聚糖应用于调节机体免疫是一种安全、绿色的产品，可用于功能性食品和药品原料的开发。

技术领域

本发明涉及低分子量海藻多糖制备的技术领域，尤其涉及一种低分子量泡叶藻聚糖的制备方法及应用。

背景技术

泡叶藻(Ascophyllum nodosum)，又称岩衣藻，是一种大型的海洋褐藻,主要在北大西洋沿岸生长繁殖。和其他褐藻(比如海带)相似。泡叶藻含有丰富的褐藻胶(alginateacid)(约占藻体所含总糖质的79％)，是工业生产褐藻胶、碘和甘露醇的主要原料之一。除褐藻胶外，泡叶藻还含有约占藻体总糖质的13％的泡叶藻聚糖(ascophyllan)和8％的岩藻聚糖(fucoidan)。在我国，泡叶藻在工业上主要被用作提取褐藻胶的原料；农业生产上用来制作化肥、饲料等；在食品行业中主要用来制作海藻粉。

高分子量泡叶藻聚糖分子量大(平均分子量约390kDa)且结构复杂，其免疫诱导活性与糖分子结构的关系尚不明确，与此同时,大分子多糖不利于人体消化吸收。目前,国内外用于制备低分子量海藻聚糖的技术主要采用酸、碱水解法及氧化法。这些方法虽然能够降低海藻聚糖的分子量,但化学反应强烈,其后果是改变了多糖的立体结构，同时引起活性基团的部分脱落,最终降低了产品的生物活性甚至活性完全丧失。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种低分子量泡叶藻聚糖的制备方法及应用，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种低分子量泡叶藻聚糖的制备方法及应用，以获得高纯度且具有强免疫诱导活性的低分子量泡叶藻聚糖，用以提高其在人体消化吸收效率及免疫诱导活性。

为了实现上述目的，本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

一种低分子量泡叶藻聚糖的制备方法,包括以下步骤：

步骤一、泡叶藻粉的制备：

将泡叶藻洗净、烘干后、粉碎，过60目标准筛，制得泡叶藻粉；

步骤二、泡叶藻聚糖干粉的制备：

称量30g泡叶藻粉，按重量体积比1:30g/mL的比例加入去离子水，100℃下提取，提取过程中不断搅拌2h，冷却后5000×g离心20min，取上清液，加入3M HCL使之终浓度为pH1.3，离心去除褐藻酸沉淀后收集上清液，加入无水乙醇使之终浓度为体积50％，过夜离心，取沉淀物，透析冻干后，制得泡叶藻聚糖干粉；

步骤三、酶解泡叶藻聚糖：

将0.5g泡叶藻聚糖干粉溶于0.02M的pH为3-7的醋酸盐缓冲液，纤维素酶按照3-7U/mL添加到上述溶液中混合均匀，45-65℃下水解1-20h，在100℃灭活15min，终止水解反应，制得不同分子量片段的泡叶藻聚糖水溶液；

步骤四、分离：将制得的不同分子量片段的泡叶藻聚糖水溶液经过分子截留量为10kDa的超滤膜分离，再经分子量截留1kDa的透析袋透析冻干，再经凝胶色谱柱分离收集多糖组分，冷冻干燥后，制得泡叶藻聚糖片段As-C。

优选地，所述纤维素酶添加量5U/mL。

优选地，所述纤维素酶最适pH为6。

优选地，所述纤维素酶最适温度为55℃。

一种低分子量泡叶藻聚糖的应用，所述泡叶藻聚糖具有免疫诱导活性，可用于功能性食品与药品原料。