[发明专利]多聚体蛋白的制备方法

权利要求书

1.多聚体蛋白的制备方法，所述多聚体蛋白是由使具有免疫球蛋白折叠结构的蛋白和能够形成亚单元结构的蛋白或其功能性片段融合而得到的单体蛋白组成的，该制备方法包括下述步骤：

步骤(A)，准备在微生物的菌体内呈不溶性颗粒形态的蛋白，该蛋白为使具有免疫球蛋白折叠结构的蛋白与能够形成亚单元结构的其他蛋白融合而得到的单体蛋白；

步骤(B)，利用含有月桂酰谷氨酸或其盐的水溶液增溶步骤(A)中准备的单体蛋白；

步骤(i)，在步骤(B)得到的溶液中添加磷酸缓冲液，使月桂酰谷氨酸或其盐的浓度达到2～5%；

步骤(C)，在含有精氨酸或精氨酸衍生物的缓冲液中稀释步骤(i)中得到的溶液，降低月桂酰谷氨酸或其盐的浓度，由此使得单体蛋白恢复天然状态的高级结构；以及

步骤(D)，利用选自下述(d1)～(d4)的方法，将步骤(C)中得到的溶液的溶剂置换成含有无机盐类和螯合剂的缓冲液，从而从系统中除去月桂酰谷氨酸或其盐，使单体蛋白的亚单元之间缔合而得到所述多聚体蛋白，

(d1)：选自凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水性相互作用层析和它们的组合的柱层析；

(d2)：超滤法；

(d3)：透析法；以及

(d4)：(d1)～(d3)中的两种以上的组合，

其中，精氨酸或精氨酸衍生物选自具有碳原子数1～6的酰基的精氨酸、精氨酸丁酯、精胺和精氨酸。

2.权利要求1所述的方法，其中，单体蛋白为scFv与链霉亲和素的融合蛋白。

3.权利要求2所述的方法，其中，上述scFv选自HyHEL-10 scFv和D1.3 scFv。

4.权利要求2或3所述的方法，其中，链霉亲和素为全长链霉亲和素或其功能性片段。

5.权利要求1所述的方法，其中，精氨酸或精氨酸衍生物为精氨酸盐酸盐。