[发明专利]一种细胞DNA的染色方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞DNA的染色方法。

背景技术

细胞DNA含量反映细胞生长及分化状态，测定其含量的变化对判断肿瘤的性质及预后具有重要意义。现阶段应用于细胞DNA染色的产品时，在酸化过程中，采用5摩尔/升盐酸进行酸化，盐酸为易制毒化学品，且由于酸度高，使细胞容易产生酸化过度导致DNA破碎，影响结果；染色时采用的染色剂为固体粉末，用户需要自己进行配制，其中经历了称量，加热，搅拌、过滤等多个过程，需要用户具备一定的实验室操作基础和基础设备的使用知识，而且配制时间较长，大概需要3～4h，容易产生误差。

发明内容

本发明的目的是为了解决现阶段应用于细胞DNA染色方法中费时且易有误差的问题，提供了一种细胞DNA的染色方法。

本发明一种细胞DNA的染色方法为：一、将细胞进行液基薄层制片，然后在固定液中固定，得到固定有细胞的玻璃片，再放入浓度为1.5～2.5mol/L的氢溴酸中酸化40～50min；二、将细胞DNA染色液中的A试剂和B试剂混合，震荡25～35min，然后放入步骤一处理后的玻璃片，染色40～50min，即完成；其中A试剂按质量百分含量由0.5％～5％硫堇、5％～25％的酸和余量的水组成；B试剂按质量百分含量由0～90％的醇、0.5％～3％的含硫盐和余量的水组成。

本发明染色方法在酸化过程中使用2摩尔/升氢溴酸替代盐酸，不仅不属于易制毒化学品，而且大大降低了酸度，不易产生酸化过度的问题，酸化时间也可以从60分钟降低到45分钟。本发明的染色液采用两种液体试剂，保质期可以达到5年，而且经过试验测试，该试剂在零下40摄氏度到40摄氏度的温度中长期存放，其化学物质没有任何性能改变。本发明染色液的A、B试剂均为液体状态，只需简单混合就可以得到满意的效果，大大节省了用户的时间，仅需1.5h，提高了工作效率，而且无论是否有操作基础都可以轻易掌握这个过程。

附图说明

图1是实施例1中采用本发明方法染色后的细胞图片；

图2是实施例2中采用本发明方法染色后的细胞图片；

图3是实施例3中采用本发明方法染色后的细胞图片；

图4是实施例中采用现有方法染色后的细胞图片。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式一种细胞DNA的染色方法为：一、将细胞进行液基薄层制片，然后在固定液中固定，得到固定有细胞的玻璃片，再放入浓度为1.5～2.5mol/L的氢溴酸中酸化40～50min；二、将细胞DNA染色液中的A试剂和B试剂混合，震荡25～35min，然后放入步骤一处理后的玻璃片，染色40～50min，即完成；其中A试剂按质量百分含量由0.5％～5％硫堇、5％～25％的酸和余量的水组成；B试剂按质量百分含量由0～90％的醇、0.5％～3％的含硫盐和余量的水组成。

本实施方式染色方法在酸化过程中使用2摩尔/升氢溴酸替代盐酸，不仅不属于易制毒化学品，而且大大降低了酸度，不易产生酸化过度的问题，酸化时间也可以从60分钟降低到45分钟。本实施方式的染色液采用两种液体试剂，保质期可以达到5年，而且经过试验测试，该试剂在零下40摄氏度到40摄氏度的温度中长期存放，其化学物质没有任何性能改变。本实施方式的A、B试剂均为液体状态，只需简单混合就可以得到满意的效果，大大节省了用户的时间，提高了工作效率，仅需1.5h，而且无论是否有操作基础都可以轻易掌握这个过程。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的震荡的速率为12Hz。其他与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤二中染色45min。其他与具体实施方式一或二不同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：所述的含硫盐为亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、硫带硫酸钠、硫带硫酸钾、偏重亚硫酸氢钠和偏重亚硫酸氢钾中的一种或几种按任意比组成。其他与具体实施方式一至三之一相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：所述的醇为乙醇、乙二醇、丙醇、正丁醇和叔丁醇中的一种或几种按任意比组成。其他与具体实施方式一至四之一相同。

本实施方式中所述的醇均为分析纯。