[发明专利]一种肠炎沙门氏菌的检测方法及其检测试纸条

说明书

本发明公开了一种肠炎沙门氏菌的检测方法及其检测试纸条，基于革兰氏染色原理，结晶紫先将细菌染为蓝紫色，然后由于毛细管作用，被染色的细菌沿着硝酸纤维素膜迁移，基于抗原抗体特异性结合原理，被T线的抗体捕获，使T线显示可见的强烈的蓝紫色。只需将细菌进行简单的染色就可得到明亮的蓝紫色，而不使用任何纳米材料标记抗体，免去了复杂的标记过程。该发明只用一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，打破了传统同时采用两种抗体的夹心检测方法，大大节省了成本，解决了配对抗体的困难，更简单，方便，新颖。

技术领域

本发明属生物检测领域，具体涉及一种肠炎沙门氏菌的检测方法及其检测试纸条。

背景技术

沙门氏菌是引起食物感染和食物中毒的最重要食源性致病菌之一，人食入过量活菌会产生腹泻、呕吐、发热等症状，严重者会出现败血症、脱水、酸中毒、无尿、心力衰竭等，急救不及时将会危及生命。鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌和肠炎沙门氏菌最为常见。沙门氏菌是我国众多食品标准中的检测项目，且要求不得检出。快速、准确、灵敏、简便地检测出沙门氏菌，在医疗卫生、食品卫生、动物疫病监测等方面具有重要的意义。迄今为止，已经报道了检测沙门氏菌的几种可行方法，包括传统沙门氏菌检测方法，酶联免疫吸附测定，聚合酶链反应和电化学生物传感器。但是，这些方法不适合实时检测，因为它们需要依靠复杂而昂贵的仪器，复杂的样品预处理和操作，耗时费力。为了更早更灵敏地检测肠炎沙门氏菌，特别是对于定点护理应用，实现易于操作，快速，便携和低成本的方法仍然是巨大的技术挑战。

近年来，免疫层析试纸条，由于其制备和操作方便，成本低，一次性使用，检测时间短，结果直观可靠等优点，得到了广泛的关注，成为快速检测的成熟诊断工具。传统试纸条用胶体金作为探针，但是灵敏度低，这阻碍了其进一步的应用。为了满足需求，研究者从诸多方面致力于提高试纸条检测方法的灵敏度，例如通过使用不同的标签如荧光微球，量子点，磁性微球，上转换材料，石墨烯，复合材料等，虽然提高了灵敏度，但这些材料不稳定性和抗体的复杂交联限制了其现场应用。此外，这些纳米材料的合成需要严格的操作，并且一些使用的试剂是极其昂贵的。因此，迫切需要不依赖于化学合成，非常稳定，低成本和无标签的信号，以简化分析框架，提高试纸条的实用性。

经常使用的两种试纸条格式为竞争性测定和夹心测定。竞争形式最常用于测试小分子分析物，其中仅需要一种高质量的抗体就能充分满足要求。相比之下，夹心测定形式经常用于测定多于一种表位如细菌和蛋白质的分析物，其需要两种抗体(单克隆或多克隆)来识别不同的抗原位点以形成夹心结构。遗憾的是，据报道，多克隆抗体(PcAb)在特异性方面与单克隆抗体(McAbs)不相称，即使不同批次的由相同抗原制备的多克隆抗体都不能保证其一致性。尽管细胞融合是用于单克隆抗体生产的经典技术，但单克隆抗体的筛选过程是冗长乏味和复杂的，而且产高质量的抗体有幸运因素的存在，让这两种高质量的抗体形成完美的夹心配对更困难。

发明内容

针对现有技术中的缺陷和不足，本发明采用的一种肠炎沙门氏菌的检测方法及其检测试纸条，打破传统的沙门氏菌的夹心检测方法，只用一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，只需将细菌进行简单的染色就可得到明亮的蓝紫色，而不使用任何纳米材料标记抗体，免去了复杂的标记过程。

为达到上述技术效果，本发明采取的技术方案为：

一种肠炎沙门氏菌的检测方法，包括用结晶紫将待检测样品中的肠炎沙门氏菌进行染色得到待检液，再通过肠炎沙门氏菌单克隆抗体捕获待检液中的染色后的肠炎沙门氏菌。

具体的，所述的结晶紫为结晶紫溶液，结晶紫溶液的质量百分浓度为0.0005％～0.001％，肠炎沙门氏菌单克隆抗体的用量为1～1.5mg/mL。

再具体的，结晶紫将待检测样品中的肠炎沙门氏菌进行染色的染色时间至少为1分钟，原则上，染色时间的界定一般是给出最小的染色时间值，染色时间1分钟是保证肠炎沙门氏菌能被染色的最低时间，最好是，1～5分钟，肠炎沙门氏菌单克隆抗体捕获待检液中的染色后的肠炎沙门氏菌的捕获时间为10～15分钟。