[发明专利]一种基于低代PAMAM树状分子负载抗癌药物的自组装纳米粒及其在抗肿瘤方面的应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种纳米给药系统EL@PAMAM/HA自组装纳米粒的制备及抗肿瘤应用。本发明基于低代树状大分子PAMAM（G0/G1）和肿瘤细胞CD44受体靶向的透明质酸（HA），采用溶剂交换法制备靶向自组装纳米给药系统EL@PAMAM/HA NPs，该小分子自组装纳米载药系统可以包载厄洛替尼这种抗肿瘤药物，具有pH响应，在酸性条件下释药更多，并能够靶向CD44高表达肿瘤细胞，可特异性地输送更多治疗药物至肿瘤部位发挥药效，有显著的治疗优势。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种纳米给药系统EL@PAMAM/HA自组装纳米粒的制备及抗肿瘤应用。

背景技术

厄洛替尼(Erlotinib)的通用商品名称为特罗凯，是于2004年正式获得美国 FDA批准上市的抗肿瘤靶向治疗药物，同时得到了我国国家食品药品监督管理总局（CFDA）的认证，并已于2007年批准进入我国市场。厄洛替尼（本发明简称EL）的化学结构式为

，化学名为 N-(3-乙炔苯基)-6,7-双(2-甲氧乙氧基)-4-喹啉胺盐酸盐，是一种对表皮生长因子受体（Epithelial Growth Factor Receptor, EGFR）具有高选择性的小分子喹唑啉类衍生物。EL用于两个或两个以上的化疗失败后的局部晚期或转移的非小细胞肺癌（NSCLC）的三线治疗方案，也常与抗癌药吉西他滨联合用于治疗局部晚期或转移性的胰腺癌。厄洛替尼主要在肝脏清除，经体外细胞色素酶P450分析表明厄洛替尼主要通过CYP3A4代谢，少量通过CYP1A2和肝外同工酶CYP1A1代谢。口服EL最常见的不良反应是皮疹（75%）和腹泻（54%），皆为不明原因的不良反应且较为轻微，无需中断用药即可处理。

大量研究表明EL针对EGFR突变的非小细胞肺癌（NSCLC）的抗肿瘤作用是体现在其能够抑制与表皮生长因子受体（EGFR）相关的细胞内酪氨酸激酶（TK）的磷酸化，进而阻断表皮生长因子（HER1）的信号传导，其中，TK是肿瘤细胞生长的重要物质，EL可通过抑制TK的活性来抑制肿瘤生长。本发明以人肺腺癌细胞（A549）为代表的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞验证基于低代树状大分子PAMAM（G0/G1）和肿瘤细胞CD44受体靶向的透明质酸（HA）构建具有靶向功能的自组装纳米给药系统EL@PAMAM/HA NPs。

聚酰胺-胺（PAMAM）树状大分子是一类由中心向外对称发散并高度分枝的新型纳米生物材料，由于具有纳米尺度、高水溶性、单分散性以及结构可调性，可通过分子自组装形成大小适宜的纳米粒子，提高药物的生物相容性、生物利用度和靶向性，因此可用作抗癌药物和成像药物的输送载体。目前PAMAM的应用仍然是以药物载体为主，例如专利CN201410271351中公布了一种具有肿瘤靶向的叶酸-PAMAM-熊果酸纳米药物，该纳米药物所采用的初始材料是高毒性的G3和G5代聚酰胺-胺型树状大分子(PAMAM)，需将PAMAM 表面的氨基置换成羟基以降低材料本身的毒性，再将叶酸和熊果酸与PAMAM 表面的羟基反应，最终合成目标产物，该反应过程复杂，生产成本较高，产率却不高，这在一定程度上限制了它的应用。低代PAMAM分子（G0 如式 I，G1 如式 II）所示，表面氨基数为4和8，合成简单，毒性较低，价格低廉，可改善疏水性药物的溶解度，提高生物利用度，因此被选用作本发明的纳米输送载体。

透明质酸（Hyaluronic Acid, HA）是一种在生物体内广泛存在的天然线性糖胺多糖，其化学结构式为

。透明质酸的特异性受体 CD44 分子在多种恶性肿瘤如乳腺癌、皮肤癌、卵巢癌等细胞表面都高度表达。HA通过与特异性受体-配体机制与 CD44分子相结合，经细胞内吞作用进入细胞质内，可以选择性地进入肿瘤细胞，然后在透明质酸酶以及酸性水解酶等酶的作用下降解，实现靶向给药，故透明质酸常被用作纳米药物的靶标。