[发明专利]一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法

权利要求书

1.一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法，其特征在于，具体操作方法如下：

（1）通过分子克隆的方法将所需测量的目标促凋亡分子的cDNA与EGFP分子的cDNA连接克隆在高表达载体内，根据需求将其放在EGFP的N端或者C端；

（2）通过电转、病毒转染方法将质粒转染到被测试的肿瘤细胞中；

（3）24小时或者48小时后，收集细胞，用APC标记的Annexin V染色，并通过流式细胞仪采集肿瘤细胞中EGFP或APC或EGFP和APC的荧光强度信息，从而采集肿瘤细胞耐受促凋亡分子的临界点的EGFP的荧光强度信息；

（4）在采集样品的同时，需利用流式细胞仪在同样的工作条件下同时采集含有一定数量的梯度FITC的标准荧光微球的荧光强度信息，做出FITC荧光强度与数量的直线关系图；

（5）体外纯化EGFP蛋白质，通过荧光分光光度计和流式细胞仪测定并计算标准FITC荧光微球的数量与发射光强度的线性关系；通过荧光分光光度计和流式细胞仪测定并计算纯化的EGFP蛋白质分子数量与发射光强度的线性关系，由此，可计算出发射光强度相同时，标准FITC荧光微球与EGFP蛋白质数量之间的换算关系；

（6）将肿瘤细胞耐受促凋亡分子的临界点的EGFP的荧光强度信息换算成EGFP的分子数目，从而得到耐受促凋亡分子的绝对数值。