[发明专利]一种肝癌检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种肝癌检测试剂盒。

背景技术

肝脏是人的主要消化器官，因不注意饮食卫生，它容易导致各种疾病，如各种肝炎、肝腹水、肝硬化等，特别是肝癌，对人类的危害更大，很多时候人体并没有觉察，没有疼痛感，当感觉到疼痛时已经进入了肝癌的晚期很难治疗，给病人带来很大的痛苦。

原发性肝癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是严重威胁人类生命健康的疾病。肝细胞癌恶性程度高，容易复发和转移，预后差，而且早期诊断较困难，往往延误了最佳治疗时期。我国是肝癌高发国家，每年约11万人死于肝癌，占全世界肝癌死亡人数的45％。发病率和死亡率呈现上升趋势，且发病年龄构成年轻化，每年用于肝癌治疗的医疗支出大为增加，肝癌严重危害我国人民生命财产安全，并且是影响社会经济发展的一个重要因素。

癌症的早期诊断对其成功治愈有重要的作用。容易获得并且稳定的生物学标记能够提供一系列相关的有价值的肿瘤生物学信息。甲胎蛋白(AFP)是目前肝癌(HCC)诊断的主要血清学指标，但是甲胎蛋白检测的敏感性和特异性仍不高，假阳性率较高，因为人们对癌症的恐惧心理，假阳性的检测结果容易给患者造成巨大的精神压力和财产损失。现有技术中，蛋白的检测通常采用抗体的方法，由于抗体制备复杂，成本较高，在检测中并不适合廉价的推广。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肝癌检测试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种肝癌检测试剂盒，包括有cel-miR-39序列，以及用于cel-miR-39、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-455-5p、hsa-miR-30b-5p、hsa-miR-99a-5p、hsa-miR-1271-5p、hsa-miR-136-3p、hsa-miR-3158-3p、hsa-let-7f-5p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-432-5p、hsa-miR-4446-3p和hsa-miR-486-3p实时定量PCR的引物，还包括有反转录试剂及实时定量PCR试剂，还包括含有能特异性检测RAI16蛋白的核酸适体，且核酸适体序列如SEQ ID NO.1-23任一条序列所示，或者在该序列的基础上进行的一个或几个核苷酸的替换，并保留其活性，还包括有加了草酸钠抗凝剂的真空采血管和真空采血针组件。

作为本发明进一步的方案：所述反转录试剂为TAKARA 6210A试剂盒。

作为本发明进一步的方案：所述实时定量PCR试剂为DyNAmoSYBR Green qPCR。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：利用本发明的核酸适体，可以捕获血液中的RAI16，从而用于肝癌筛查，部分代替单克隆抗体捕获RAI16进行检测，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点；采用的miRNA均为现有报道已经发现的miRNA，其测序所用接头和扩增引物均有成熟的市售商品，可以方便的从市场上获得，试剂盒易于制备。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[实施例一]

1.蛋白的制备

根据已有的维甲酸诱导蛋白RAI16的序列NP_073586.5，获得相应的基因序列，利用CN1318594C中实施例1的真核表达蛋白的方法，进行蛋白的表达，采用常规的蛋白纯化方法得到纯化的蛋白，浓度为100mg/ml，4度储存备用。

2.适配体的制备

设计两端包含大约20个核苷酸、中间包括35个核苷酸的随机核酸文库如下：‘5-TGCAAGCAGTGACGAAGATC(N35)GGACAGTTGAAAGTTGACGA-3’；N35代表35个随机核苷酸。