[发明专利]糖类抗原50的板式化学发光法检测试剂盒及制备方法

说明书

本发明涉及一种糖类抗原50的板式化学发光法检测试剂盒，包括的试剂有生物素标记的CA50抗体溶液、抗生物素抗体包被的酶标板、辣根过氧化物酶标记的CA50抗体溶液、CA50校准品A‑F、浓缩洗液、底物液A、底物液B。本发明的主要设计思路是在化学发光免疫分析基础上，通过引入具有抗生物素抗体‑生物素体系，稳定试剂盒检测特异性的同时，大幅增加了检测灵敏度以及检测时间。改进了高温振荡式抗生物素抗体包被工艺，从而降低抗体/抗原使用量的同时，简化了试剂生产流程，缩短了生产周期。

技术领域

本发明属于生物试剂盒材料领域，具体涉及一种用于糖类抗原50的定量检测试剂盒及检测方法，可快速、简便、高效、灵敏地对人血清样本中糖类抗原50的定量检测。

背景技术

CA50（Carbohydrate Antigen 50,简称CA50）是指肿瘤标志物(Tumor Marker)，是反映肿瘤存在的化学类物质。它们或不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织，或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量，它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质，借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能，以帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导。

CA50是一种唾液酸酯和唾液酸糖蛋白，正常组织中一般不存在，当细胞恶变时，糖基化酶被激活，造成细胞表面糖基结构改变而成为CA50标志物。正常血<20μg/L，许多恶性肿瘤患者血中皆可升高，如66.6%的肺癌、88.2%的肝癌、68.9%的胃癌、88.5%的卵巢或子宫颈癌、94.4%胰或胆管癌，其他如直肠癌、膀脏癌等皆有70%以上是升高的。

糖蛋白抗原CA50是一种非特异性的广谱肿瘤标志物。是一种唾液酸酯和唾液酸糖蛋白，正常组织中一般不存在，当细胞恶变时，糖基化酶被激活，造成细胞表面糖基结构改变而成为CA50标志物。正常血<20μg/L，许多恶性肿瘤患者血中皆可升高，如66.6%的肺癌、88.2%的肝癌、68.9%的胃癌、88.5%的卵巢或子宫颈癌、94.4%胰或胆管癌，其他如直肠癌、膀脏癌等皆有70%以上是升高的。

癌抗原50(CA50)作为非特异性的广谱肿瘤标志物，与癌抗原19-9有一定的交叉

抗原性，主要用于胰腺癌、结肠/直肠癌、胃癌的辅助诊断，其中胰腺癌病人增高最明显。增高：见于胰腺癌(阳性率可达87%)、结肠/直肠癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤；溃疡性结肠炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高。

临床上检测CA50为了提高肿瘤诊断水平和改善治疗效果，从检测角度上来说，目前临床上用于测定CA50抗原的方法主要有酶联免疫技术和化学发光技术等。过去以酶联免疫技术为代表的人CA50抗原测定试剂盒由于方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已无法适应医院或检测中心对灵敏度的要求；目前应用较多的为酶联免疫技术、时间分辨荧光免疫分析和化学发光技术，其中化学发光技术兴起于上个世纪 80年代，是继酶联免疫技术和放射性免疫技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，且成本低廉、操作简便，无放射性同位素损伤和污染等特点，得到了飞速发展。

本试剂盒主要用于对相关恶性肿瘤患者进行动态监测以辅助判断疾病进程或治疗效果，不能作为相关恶性肿瘤早期诊断或确诊的依据，不宜用于普通人群的肿瘤筛查。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术提供一种板式化学发光法检测人血清CA50抗原的试剂盒及其制备方法，研发和优化了与血清学免疫反应原理相关的各种关键技术，从而提高了针对临床患者体内的CA50抗原检测灵敏度和准确性，开发出灵敏度高、稳定性好、生产便捷、操作方便的板式化学发光诊断试剂。

本发明的主要设计思路是在化学发光免疫分析基础上，通过引入具有抗生物素抗体-生物素体系，从而稳定试剂盒检测特异性的同时，大幅增加检测灵敏度。

本发明解决上述问题所采用的技术方案为：