[发明专利]一种用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤一：活化磁珠，采用活化剂EDC与磁珠在活化缓冲溶液中进行活化反应，室温条件下活化90min；

步骤二：磁珠与抗体偶联，采用活化后的磁珠与副溶血性弧菌抗体在偶联缓冲液中偶联，室温条件下振荡26h，制备副溶血性弧菌免疫磁珠；

步骤三：封闭免疫磁珠，免疫磁珠经洗涤缓冲液洗涤，采用封阻缓冲液封闭免疫磁珠，37℃作用1～2h或4℃过夜；

步骤四：保存，制备好的副溶血性弧菌免疫磁珠存放于保存缓冲液中，4℃保存待用。

2.根据权利要求1所述的用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠的制备方法，其特征在于，

所述活化剂EDC为1mg/mL；

所述活化缓冲溶液为0.1M MES含0.05％吐温-20，pH6.0-6.5；

所述偶联缓冲液为0.1M PBS含0.05％吐温-20，pH7.0-7.4；

所述洗涤缓冲液为0.1M PBS，0.1％BSA，0.05％吐温-20；

所述封阻缓冲液为0.1M PBS，含1％BSA和0.05％吐温-20，pH7.0-7.4；

所述保存缓冲液为0.1M MES，pH7.4。

3.一种用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠的应用方法，使用如权利要求1或2制备的副溶血性弧菌免疫磁珠，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤I：根据国标方法GB 4789.7对样品进行制备，将1mL副溶血弧菌免疫磁珠加入到制备好的样品中，37℃振荡孵育1h后至磁分离器，去上清；

步骤II：洗涤免疫磁珠后加入0.3mL偶联缓冲液，分别吸取0.1mL混合液涂布3个弧菌显色培养基，37℃培养18h-24h计数。

4.根据权利要求3所述的用于富集副溶血性弧菌的免疫磁珠的应用方法，其特征在于，制备的副溶血性弧菌免疫磁珠分离与检测食品、农业用品、化妆品、养殖环境和临床等领域的副溶血性弧菌。