[发明专利]一种大菱鲆超雌亲鱼的制种方法

说明书

一种大菱鲆超雌亲鱼的制种方法，属于鱼类养殖技术领域，它的步骤如下：(1)采用遗传失活鱼类异源精子诱导有丝分裂雌核发育的方法获得大菱鲆有丝分裂雌核发育卵；(2)对所获有丝分裂雌核发育卵进行孵化和苗种培育，得到有丝分裂雌核发育苗种；(3)将所获得的有丝分裂雌核发育苗种养殖成为有丝分裂雌核发育后备亲鱼；(4)对有丝分裂雌核发育后备亲鱼进行促熟培育和产卵调控，能够正常成熟和采卵的雌鱼即为超雌亲鱼，挑选出来直接用于大菱鲆全雌苗种的商业化生产；本发明证明了大菱鲆WW鱼可以成活和繁殖，为利用超雌鱼进行商业化生产大菱鲆全雌苗种奠定了基础；同时制备周期缩短了50％以上，成本则只有现有技术的几分之一至十几分之一。

技术领域

本发明属于鱼类养殖技术领域，具体地涉及一种大菱鲆超雌亲鱼的制种方法。

背景技术

作为我国北方重要的养殖鱼类，大菱鲆(Scophthalmus maximus)雌雄生长差异显著，养殖24个月雌鱼体重是雄鱼的1.8倍(Imsland et al.,1997，Aquaculture Research,28:101–114)，养殖全雌苗种成为提高大菱鲆养殖效率的一种重要技术手段而广受关注。

根据推测，大菱鲆的性别决定机制为雌性异配的ZW型，生产全雌苗种可供选择的方法包括3种：(1)人工挑选雌性苗种；(2)性别分化期间采用雌激素处理诱导表型全雌的苗种；(3)制备超雌鱼亲鱼(WW雌鱼)，利用超雌鱼与普通ZZ雄鱼交配，生产基因型和表型都是雌性的全雌苗种。采用人工挑选雌性苗种的方法，需要淘汰一半左右的雄性苗种，会显著增加苗种生产成本，另外，大菱鲆外表无雌雄差异性特征，性别特异的分子标记成本高、准确率低，也无法大规模采用，因此人工挑选的方法不可取。雌性激素直接诱导的方法有污染环境和影响食品安全的可能性，已被许多国家禁用；而制备超雌亲鱼，利用超雌亲鱼与普通雄鱼交配生产全雌苗种的方法，可以避免上述两种方法的缺点，成为实现大菱鲆全雌苗种商业化生产的最佳途径之一。

迄今为止，对ZW型性别遗传决定的鱼类研究较少，WW型超雌鱼本身不是一个自然存在的基因型，具备这种人为诱导产生的基因型鱼类是否可以正常发育和成熟尚未见报道。有关大菱鲆超雌亲鱼的制备，Baroiller和D'Cotta 2016年(Sex Dev 10:242-266,2016)提出一条通过激素诱导和测交筛选相结合的大菱鲆超雌亲鱼制种技术路线，也因为制种周期长和成本高，至今还没有得到完整实施。

发明内容

本发明公布了一种制备大菱鲆超雌亲鱼的方法，以解决目前不能利用超雌鱼进行全雌苗种生产的难题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种大菱鲆超雌亲鱼的制种方法，它的步骤如下：(1)采用遗传失活鱼类异源精子诱导有丝分裂雌核发育的方法获得大菱鲆有丝分裂雌核发育卵；(2)对所获有丝分裂雌核发育卵进行孵化和苗种培育，得到有丝分裂雌核发育苗种；(3)将所获得的有丝分裂雌核发育苗种养殖成为有丝分裂雌核发育后备亲鱼；(4)对有丝分裂雌核发育后备亲鱼进行促熟培育和产卵调控，能够正常成熟和采卵的雌鱼即为超雌亲鱼，挑选出来直接用于大菱鲆全雌苗种的商业化生产；

步骤(1)所述遗传失活鱼类异源精子选择的标准：1)遗传失活鱼类异源精子与大菱鲆卵人工授精的受精率高于70％，以保证有较高的诱导效率；2)杂种仔鱼不能成活，保证即使精子的遗传失活处理失败，所形成的杂种胚胎也不能培育出苗种，以节省后续苗种筛选工序。

进一步，步骤(1)所述的遗传失活鱼类异源精子为真鲷冷冻精子。

进一步，步骤(1)中遗传失活鱼类异源精子与大菱鲆卵子受精后85-90min，将受精卵置于静水压机的压力舱中，在75MPa压力强度下进行休克处理，持续处理6min后泄压，取出受精卵，置于孵化器中继续孵化；压力处理过程中海水温度14.5±0.5℃。