[发明专利]一种抗CD38纳米抗体、编码基因及应用

说明书

本发明涉及一种抗CD38纳米抗体、编码基因及应用。该抗CD38纳米抗体是如下a)或b)的蛋白：a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)在序列表中序列2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与特异性识别CD38相关的由a)衍生的蛋白质。该抗CD38纳米抗体能够与CD38高效、特异性地结合，亲和力高达4nM，可在大肠杆菌表达系统中低成本、大规模生产，在检测和制药领域具有重要的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，涉及一种抗CD38纳米抗体、编码基因及应用。

背景技术

二十世纪八十年代，CD38发现于T淋巴细胞表面，被用作细胞分化的标记物。2004年，在多发性骨髓瘤细胞中发现CD38普遍处于高表达状态，而在正常淋巴细胞、骨髓细胞以及一些非造血细胞上处于低表达状态，这使CD38成为治疗骨髓瘤的一个理想靶点。目前，有数个抗CD38的单克隆抗体正在临床试验阶段，包括daratumumab、SAR650984和MOR202等。

1993年，Hamers-Casterman等人在驼科生物的血液中发现了仅有重链组成的重链抗体。而重链抗体的可变区，是能够与抗原结合的最小抗体单元，具有与重链抗体相似的抗原结合能力，称为单域抗体或纳米抗体。与传统单克隆抗体相比，单域抗体有以下优势：(1)分子量小，穿透性好；(2)有更好的溶解性和稳定性；(3)易大量生产，可以在细菌、酵母或植物中表达，所以成本很低；(4)不易聚集；(5)免疫原性低，更容易改造或人源化。

相对于单域抗体而言，单克隆抗体的生产成本非常高，因为它一般用哺乳细胞进行生产；另外，获得具有细胞毒活性的高亲和力抗体相对困难；且其功效的发挥还与机体的免疫状态相关，往往还因为活性不够需要与其他药物联用等缺点。而相对于单链抗体Scfv而言，纳米抗体在亲和力方面与其对应的scFv相当，但在可溶性、稳定性、对聚集的抗性、可重折叠性、表达产率以及DNA操作、文库构建和结构测定的容易性方面超越scFv。

发明内容

针对以上不足，我们开发制备了工艺简单、成本低、特异靶向CD38的纳米抗体，可用于检测和制药领域。

本发明为了解决上述问题，提供的技术方案之一为：提供一种抗CD38纳米抗体，是如下a)或b)的蛋白：

a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

b)在序列表中序列2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与特异性识别CD38相关的由a)衍生的蛋白质。

本发明为了解决上述问题，提供的技术方案之二为：提供该抗CD38纳米抗体的编码基因。

本发明提供的所述编码基因是如下1)或2)或3)的基因：

1)其核苷酸序列是序列表中序列1；

2)在严格条件下与序列1限定的DNA片段杂交且编码与特异性识别CD38相关蛋白的DNA分子；

3)与1)或2)的基因具有90％以上的同源性，且编码与特异性识别CD38相关蛋白的DNA分子。

本发明采用PCR扩增的方法，获得了抗CD38纳米抗体的编码基因的CDS序列。其cDNA序列全长为375bp(序列2)，具体序列如下：