[发明专利]一种用于液基薄层细胞的免疫p16INK4a抗原保存液及其制备方法

说明书

本发明属于临床医学病理技术领域，具体涉及一种用于液基薄层细胞的免疫p16^INK4a抗原保存液及其制备方法。其包括以下成分及其浓度：NaCl 60‑100mmol/L、KCl 2‑10mmol/L、乙二胺四乙酸二钠1‑5mmol/L、尿素30‑50mmol/L、柠檬酸钠1‑5mmol/L、蔗糖5‑20mmol/L、PEG‑400 4‑10mmol/L、多聚甲醛2％‑3％、甘油2‑10mmol/L和二硫苏糖醇10‑20mmol/L。本发明保存液不仅适用于传统的液基细胞制片、染色，还适用于宫颈液基细胞p16^INK4a蛋白免疫标记染色，避免了传统非特异性巴氏染色的缺陷。

技术领域

本发明属于临床医学病理技术领域，具体涉及一种用于液基薄层细胞的免疫p16^INK4a抗原保存液及其制备方法。

背景技术

宫颈癌是妇科最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，位居女性恶性肿瘤第二位，严重威胁着女性的身体健康和生活质量。中国是宫颈癌的高发国家，发生率及死亡率约占全世界的1/3。宫颈癌也是目前唯一病因明确，通过有效的早期诊断及治疗可以完全治愈的癌症。

当前宫颈癌及癌前的病变的早期诊断分为“三阶梯”。第一步为阴道脱落细胞学检查，筛查出可疑病例。第二步为阴道镜检查，在阴道镜下对可疑病例取活检组织。然后进行第三步活体组织检查，最终确诊。做为宫颈癌及癌前病变诊断的第一步，阴道脱落细胞学检查起着非常重要的门户作用，当前脱落细胞学的主要检查技术为液基薄层制片技术。液基薄层细胞制片术改良自传统“巴氏涂片法”，使用独特的细胞保存液和液基薄层制片机器，代替传统巴氏的手工涂片法，可制出均匀薄层的细胞有利于病理医院镜下观察，降低了传统巴氏的漏诊率和假阳性、假阴性率。

然而液基薄层细胞制片术采用的依旧是非特异性的巴氏/HE染色，并未从根源上弥补细胞学检查的技术缺陷。受取材、染色、及病理医生的主观判断等因素的影响，仍存在假阴性率高、灵敏度和特异性不理想等缺点。特别是对病理医生的要求较高，且我国病理医生缺乏、病理医生的工作量大，易出现人为因素导致漏检的情况。

寻找新的灵敏度和特异度更好的分子生物标志物用于宫颈癌的早期诊断具有重要意义。

液基细胞学的技术缺陷促进了宫颈癌及癌前病变筛查辅助技术的发展，当前主要的辅助筛查技术为HPV检测，目前HPV的检测方法有多种，灵敏度和特异度较高的有杂交捕获二代检测系统(HC-II)、荧光定量PCR技术等。

研究己揭示高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的持续感染是导致宫颈癌的主要原因。目前已知的HPV亚型有近200种，大多数不会引起宫颈癌，只有14种高危型，是引起宫颈癌的主要原因。女性的一生中，感染HPV的风险超过50％，而这些感染者有90％以上可在一至两年内通过人体自身的免疫力清楚掉HPV，即转阴自愈。因而HPV检测作为一个筛查指标明显缺乏特异性，易导致病人的心理恐慌和过渡医疗。且HPV分子生物学检测技术对实验环境和人员的要求较高，检测价格较贵，限制了其在临床上的广泛应用。

已知宫颈癌发生的主要原因是持续性的人乳头瘤病毒(HPV)感染(99％以上)。HPV的持续感染会导致病毒的致癌基因蛋白E6和E7含量升高，E6和E7作用是可分别与人体抑癌基因蛋白p53和pRB结合，E6通过抑制P53而阻断凋亡，E7通过抑制pRB使细胞周期失控，并导致p16^INK4a表达上调。