[发明专利]一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒、其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学技术领域，尤其涉及一种一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒及其制备方法。

背景技术

抗穆勒氏管激素（anti-Mullerian hormone，AMH）是转化生长因子β 超家族的成员之一，由Professor Alfred Jost于1974年首先发现。AMH是由两个相同的70KD亚基，通过二硫键连接组成的二聚糖蛋白，相对分子质量为140KD；人类AMH编码基因位于19号染色体短臂，大小2.4～2.8kb，含有5个外显子。

抗穆勒氏管激素（AMH）在性腺器官发育过程中起着重要作用，是男女性腺功能的重要标记物之一：在男性AMH主要由睾丸间质细胞产生，始于胚胎形成并贯穿生命始终；在男性胎儿的发育过程中，AMH导致穆勒氏管退化，形成正常发育的男性生殖管道。在女性AMH主要由卵巢颗粒细胞产生，血清AMH保持相对于男性较低的一个水平，从青春期开始，血清AMH水平随时间慢慢降低，并在更年期降低到ELISA法检测不到的水平。

目前，国内外用于AMH检测采用的方法原理主要有免酶联免疫法、化学发光法和胶体金法。化学发光需要专用分析仪，且价格昂贵，酶联免疫法大多采用96微孔板检测，步骤繁琐耗时，胶体金法操作简单、使用方便、检测速度快。

发明内容

本试剂盒采用的基本原理为免疫胶体金层析法：试纸条上的检测带（T）包被有与待检物相对应的抗AMH抗体，在对照带（C）包被抗亲和素抗体，在偶合物垫上包被有胶体金标记的抗AMH抗体和胶体金标记的亲和素。检测时，当样本中含有待检物时，样本中的待检物与胶体金标记的抗AMH抗体偶合物形成免疫复合物，随后免疫复合物上的待检物被捕获并固定在硝基纤维素膜上形成一条红色的检测带（T），同时，偶合物垫上的亲和素标记物流经对照区（C）并被已固定的抗亲和素抗体所捕获形成一条红色对照带，反应完成后，分析仪对对照带和检测带进行分析，计算出样本中的抗缪勒氏管激素浓度。

一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

一、包被硝酸纤维素膜

1）配制包被液：将抗AMH抗体和亲合素抗体分别配制成0.5-2mg/mL的包被浓度；

2）包被：将硝酸纤维膜裁成片，将步骤1）中配包被液分别包被在膜片上，制成含AMH抗体包被液的硝酸纤维膜和含亲合素抗体的硝酸纤维膜；

3）干燥：将包被好的硝酸纤维膜置于37℃恒温干燥18-20个小时；

二、包被金标垫

1）标记抗体：制备胶体金标记的鼠单抗AMH抗体和亲合素偶合物，并配制成0.5-2mg/mL的包被浓度；

2）包被：将金标垫切割成片，用封闭液封闭后干燥，将上一步骤配制好的包被液包被在金标垫上；

3）干燥：将包被好的金标垫条置于37℃恒温干燥18-22个小时。

三、贴膜

1、将包被的硝酸纤维素膜、包被金标垫、样品垫和液体吸水垫按次序依次组合后黏贴在PVC板上，制成检测条；

四、切割

1）将（三）中贴好的检测条切成切割成单人份的4.0±0.05mm的条带；

五、组装

1）将条带按照次序装于金标外壳上，然后压紧金标上盖。

一种测定抗缪勒氏管激素的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：，将试剂盒平放，用加样枪在加样孔中加入待测样本，放入金标免疫分析仪中，得到检测结果。

一种用于测定抗缪勒氏管激素的试剂盒。

本发明的有益效果在于，本发明检测卡能够快速定量检测人血清、血浆、全血中的AMH浓度，首先操作简单，使用方便，单人份独立包被，克服了小样本量不能即时检测的弊端，20分钟即可报告浓度结果，大大缩短了检测时间。

具体实施方式

以下结合为对本发明的具体说明：

实施例1

一、包被硝酸纤维素膜

1）配制包被液：将抗AMH抗体以及亲合素抗体配制成1.5mg/mL包被浓度；

2）包被：将硝酸纤维膜栽成300mmX25mm的膜片，通过包被机，将1）中配置好的包被液包被在膜片上；

3）干燥：将包被好的膜片条置于37℃恒温干燥19个小时。

二、包被金标垫

1）标记抗体：制备胶体金标记鼠单抗AMH抗体和亲合素偶合物，并配制成1mg/mL的包被浓度；

2）包被：将玻璃纤维素膜切割为300X13mm的膜片，用封闭液封闭后干燥，将1）中配制好的溶液包被在垫上；