[发明专利]一种脐带干细胞除皱剂及其制备方法

权利要求书

1.一种脐带干细胞除皱剂，其特征在于，包括以下成分：脐带干细胞、透明质酸、胶原蛋白和苹果原花青素；

其中，所述脐带干细胞的密度为3×10⁷个/mL，且脐带干细胞为第三代至第五代的脐带干细胞；所述苹果原花青素的浓度为8mg/mL。

2.根据权利要求1所述的一种脐带干细胞除皱剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（一）脐带干细胞的分离培养

S1、以DMEM/F12为基础培养基，加入血小板裂解物、bFGF、L-谷氨酰胺，使血小板裂解物、bFGF、L-谷氨酰胺的终浓度分别为5%、50ng/ml、4mM/ml，4度避光保存备用；

S2、将脐带组织转移到无菌采集瓶中，以2-8摄氏度保存；

S3、将脐带从脐带采集瓶中取出，浸泡清洗，然后用手术刀切除双侧手术线结扎及淤血部分，然后用含有双抗的生理盐水冲洗3遍，去除血污，其中，所述双抗具体为1%青霉素和1%链霉素；

S4、将清洗干净的脐带置于大号培养皿中，均分成几部分，平均每部分3-4cm，并对每一小部分沿纵向进行分离，使脐带组织管状变为片状，再将片状脐带组织进行进一步的分离，切割为2-3mm²；

S5、用吸管将组织植入T75培养瓶中，密度为20-25块/瓶，稍稍倾斜培养瓶去除吸取组织时带进去的生理盐水，并将组织块均匀地铺在培养瓶中，置37摄氏度、5%CO₂的培养箱中培养， 30min后组织块将贴壁于培养面，轻柔地加入6-9ml含5%血小板裂解物的DMEM/F12培养基浸润组织块，一天后进行全量换液，以后每2-3天进行半量换液，第9天时刮除组织块；

S6、细胞继续培养至细胞融合度达80%-90%时，去除培养瓶中培养基，用生理盐水冲洗2次，加入0.25%EDTA-胰酶进行消化，待细胞变圆时加入等体积完全培养基终止消化，收集离心后，用适量完全培养基重悬，调整细胞密度为0.5×10⁵/ml进行传代，当P1代细胞融合度达到90%以上时，调整细胞密度为0.5×10⁵/ml进行传代，后续均按此标准进行传代培养；

（二）完成制备

将透明质酸、胶原蛋白、苹果原花青素溶于生理盐水，并利用0.2μm滤膜进行过滤；在过滤后的溶液中加入脐带干细胞，重悬脐带干细胞，制备得到脐带干细胞除皱剂；

其中，所述脐带干细胞的密度为3×10⁷个/mL，且脐带干细胞为第三代至第五代的脐带干细胞；所述苹果原花青素的浓度为8mg/mL。

3.根据权利要求2所述的一种脐带干细胞除皱剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S1-S4需在12小时内完成。