[发明专利]一株分泌潮霉素B特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株ZXL-1及其应用

说明书

一株分泌潮霉素B特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株ZXL‑1及其应用，属于免疫检测技术领域。本发明一株分泌潮霉素B（HB）特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株ZXL‑1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号CGMCC No.13097。将得到的特异性分泌HB抗体的杂交瘤细胞株ZXL‑1经过腹水制备以及纯化，即可得到抗HB单克隆抗体。该抗体可用于动物源食品中HB残留的免疫检测，满足目前市场上对HB快速免疫检测产品的需求。

技术领域

本发明涉及一株分泌潮霉素B特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株ZXL-1及其应用，涉及潮霉素B单克隆抗体的制备方法，以及动物源食品中潮霉素B的间接竞争酶联免疫检测方法的建立，属于免疫检测技术领域。

背景技术

潮霉素B，即Hygromycin B（HB）是一种由吸水链霉菌产生的氨基糖苷类抗生素，它可以通过抑制蛋白质合成杀死细菌、真菌和高级真核细胞。具有一定的驱虫活性，在猪禽饲料中长期添加，具有良好的驱线虫效果。

动物源性食品中兽药残留问题是近年来国际社会研究的公共卫生热点一，受到人们的普遍关注。由于临床已证明HB具有耳毒性和肾毒性，因此欧盟规定禁止使用HB作为家畜的生长促进剂。鉴于这类抗生素在临床应用方面的副作用及易使细菌产生耐药性，美国食品与药品管理局（Food and Drug Administration）对动物源性食品中氨基糖苷类兽药残留也极为关注。我国农业部235公告中规定HB可做畜禽类动物治疗用药，但不得在相关动物性食品中检出。

目前，HB的最常用的检测方法为高效液相色谱法等仪器检测方法，该种检测方法耗时长，操作需要掌握相关的专业技术，样品前处理繁琐等。而免疫分析方法具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员要求低等特点，因此适用于大量样品的现场快速筛查。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够分泌潮霉素B特异性单克隆抗体的细胞株制备方法，建立检测潮霉素B的免疫学检测方法。

本发明的技术方案：一株分泌潮霉素B特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株ZXL-1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号CGMCCNo.13097，保藏日期2016年10月31日，分类命名单克隆细胞株。

潮霉素B特异性单克隆抗体，其是由所述保藏编号CGMCC No.13097的杂交瘤细胞株ZXL-1分泌产生。

所述潮霉素B特异性单克隆抗体的应用，用于动物源食品中潮霉素B的快速免疫检测。

提供的潮霉素B杂交瘤细胞株的制备方法基本步骤为：

1、免疫原和包被原的制备：采用戊二醛法，将HB与牛血清蛋白（BSA）偶联得到的免疫原HB-BSA；采用碳化二亚胺法，与鸡蛋清白蛋白（OVA）偶联得到的HB-OVA作为包被抗原。

HB-BSA的具体合成步骤如下：

a、称取 10mg HB，溶于1mL 0.1M pH7.4的磷酸盐缓冲溶液中，再逐滴加入稀释10倍后的质量分数为25%的戊二醛溶液100μL，室温搅拌30min后，得到活化液；

b、称取50mg BSA，溶于5mL 0.1M pH 9.0碳酸盐缓冲溶液中，在不断搅拌下，逐滴加入活化液，室温下，反应3～4h后，将反应液用0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液透析，即可得到HB-BSA。

HB-OVA的具体合成步骤如下：

a、称取20mg OVA，溶于3mL 0.1M pH6.0的一水合2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）溶液中；不断搅拌下，先加入24mg N-羟基琥珀酰亚胺，15min后，再加入31mg 1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基-碳二亚胺）；在室温下，搅拌2h，得到活化液；