[发明专利]用于微量DNA提取的提取剂及其使用方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于遗传工程技术领域，具体涉及一种用于微量DNA提取的提取剂及使用方法和应用。

背景技术

20世纪50年代，随着DNA双螺旋结构模型的创立，科学家们进一步从本质上证实基因是决定人类生、老、病、死和一切生命现象的物质基础。随后兴起的分子生物学技术，特别是核酸杂交、核酸扩增和核酸序列分析等技术在基因研究过程中凸显出至关重要的作用。然而，所有这些技术首先面临的问题就是如何提取高质量的核酸，而且核酸的纯度和完整性也直接关系到后续实验的成败。目前研究人员已开发出了多种专业化的核酸提取方法，例如：酚氯仿抽提法、硅胶膜吸附柱法、磁珠法，这些方法可以有效的从核酸含量丰富的样本中提取高质量的核酸。然而，当样本极其微量，例如：单个囊胚，这些方法提取出来的核酸就无法满足后续实验的需要。

目前，现行微量DNA提取方法提取的核酸DNA总量小，还需要配合全基因组扩增或巢式PCR扩增，才能进行后续检测，额外增加的操作不仅存在试剂价格昂贵、而且操作繁琐、耗时、耗力。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于微量DNA提取的提取剂。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

用于微量DNA提取的提取剂，包括裂解液和中和液，裂解液由NaOH和Na₂EDTA组成；中和液由Tris-base组成。所述Tris-base的中文名称为三羟甲基氨基甲烷。

进一步，所述NaOH的浓度为1～50mmol/L，Na₂EDTA的浓度为0.1～1mmol/L。

进一步，所述Tris-base的浓度为1～10mmol/L，pH值为4～7。

本发明的目的之二在于保护所述提取剂的使用方法，具体包括以下步骤：

A.微量核酸裂解液和中和液配制：

裂解液：称取0.04～2g NaOH，溶于90ml蒸馏水中，加入0.2～2ml 50mmol/LNa₂EDTA,定容至100ml,混匀，常温保存备用；

中和液：称取0.1211～1.211g Tris-base溶解于90ml蒸馏水中，稀盐酸调节PH至4-7，定容至100ml；

B.微量样本的收集：通过采用不同微量样本收集技术手段，收集微量样本，并将微量样本置于PCR管中；

C.微量样本DNA裂解：

①向装入微量样本的PCR管中，加入5ul裂解液，1ul浓度为10ug/ul蛋白酶K,混匀；

②将PCR管置于PCR仪上，56℃10分钟，95℃10分钟；

③取出PCR管，置冰上，加入5ul中和液，混匀；

④4℃备用。

本发明的目的还在于保护所述提取剂在提取单个猪囊胚中的应用。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明提取剂所采用的裂解液为实验室常用化学试剂，成本低廉，节约了实验成本；(2)本发明提取剂所采用的裂解液成份稳定，不需现用现配，能够反复20000次使用，不影响使用效果，且可在室温保存至少4-6个月；(3)利用本发明的提取剂提取微量样本DNA过程中操作简单、快速，不需要繁琐的洗脱、离心等步骤；(4)本发明提取的微量核酸中DNA含量高，无需额外的全基因组扩增或巢式PCR扩增，可直接用于后续实验检测。

附图说明

图1为实施例3的电泳检测结果图谱，M为DNA marker；

图2为实施例6的电泳检测结果图谱；其中，泳道1-4为实施例4中的利用提取剂提取的猪囊胚DNA为模板进行PCR扩增的目的条带；泳道5-8为按照实施例4的酚氯仿法抽提的猪囊胚DNA为模板进行PCR扩增的目的条带；泳道9-12为按照实施例4的试剂盒法提取的猪囊胚DNA为模板进行PCR扩增的目的条带；M为DNA marker。

具体实施方式

所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1提取微量细胞DNA

1、配制DNA提取剂：

(1)裂解液：称取0.1g NaOH,溶于100ml去离子灭菌水中；另取1个烧杯，称取0.1861g Na₂EDTA,溶于10ml去离子灭菌水中；取0.4ml Na₂EDTA溶液与99.6mlNaOH溶液混匀，常温保存备用。