[发明专利]枯草芽孢杆菌和温度敏感型淀粉酶的生产方法及其应用

说明书

本公开涉及一株生产温度敏感型淀粉酶的枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的保藏编号为CGMCC No.13985。本公开还提供了所述枯草芽孢杆菌生产的温度敏感型淀粉酶及生物揭展剂和在书画揭展中的用途。本公开所提供的枯草芽孢杆菌生长速度快、发酵周期短，利用该枯草芽孢杆菌，可以生产温度敏感型淀粉酶，该温度敏感型淀粉酶可以在60℃这样较低的温度下失活，在应用于书画修复的揭展工艺过程时，可以避免对书画的高温损伤，在书画裱糊和文物修复领域具有非常好的应用前景。

技术领域

本公开涉及微生物及酶工程领域，具体地，涉及一种枯草芽孢杆菌和温度敏感型淀粉酶的生产方法及其应用。

背景技术

淀粉酶是一类能催化淀粉水解转化成葡萄糖、麦芽糖及其他低聚糖的酶的总称。很多动物、植物和微生物都含有淀粉酶。淀粉酶应用非常广泛并且产量巨大，其产量占整个酶制剂总产量的50％以上。但目前商品化生产的淀粉酶多为中温酶，在0～20℃常温范围活力很低，最适酶活温度为50-60℃，而失活温度多为90-100℃，限制了其在书画文物修复等领域的应用。目前未见对温度敏感型淀粉酶及其在书画文物揭展中应用的报道。

我国具有悠久的文明史，拥有大量承载了民族历史文化的书画文物。书画文物的保护和修复工作极为重要。揭展是古代书画文物的重新装裱过程中最重要的一环，即把画心由旧裱上揭下来的环节。在古代的书画装裱工艺中，宣纸制成的画心是用浆糊粘贴在命纸上的，这给揭展修复过程带来了极大的困难，揭展不当容易撕破画心从而对文物造成不可逆的损失。淀粉酶可以高效水解介于画心和命纸之间的浆糊，解决传统水闷润揭展困难的难题。因此近年来开始应用于古代书画文物的修复中，取得了较好的揭展效果。利用淀粉酶进行揭展后还需要对残留在画心上的淀粉酶做失活处理，以避免其继续水解书画文物重新装裱时用的浆糊。然而目前已经报道的淀粉酶的失活温度多为90-100℃左右，较高的失活温度处理会损坏书画文物本身。因此开发温度敏感的淀粉酶对古书画的修复和保护具有重要意义。

发明内容

本公开的目的是避免书画修复过程中所使用的淀粉酶失活温度过高对书画的损坏，提供一种新的有较低失活温度的淀粉酶及书画修复方法。

为达到上述目的，本公开的第一个方面提供一株生产温度敏感型淀粉酶的枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的保藏编号为CGMCC No.13985。

本公开的第二个方面提供所述的枯草芽孢杆菌在温度敏感型淀粉酶生产中的用途。

可选的，所述用途包括以下步骤：

步骤1：将所述枯草芽孢杆菌接种到种子液培养基中，在27.5-28.5℃、160-200r/min的条件下培养8-12h制备种子液；

步骤2：将所述种子液按0.9-1.1体积％的比例转接到LB发酵培养基中，在27.5-28.5℃、160-200r/min条件下培养22-26h获得发酵液；

步骤3：将所述发酵液在4℃、7500-8500r/min离心4-6min，去除沉淀，取上清液作为酶液。

可选的，所述种子液培养基的组成成分包括：葡萄糖0.45-0.55g/L，可溶性淀粉1.8-2.2g/L，酵母粉0.45-0.55g/L，胰蛋白胨0.45-0.55g/L，酸水解酪蛋白0.45-0.55g/L，七水硫酸镁0.045-0.055g/L，磷酸氢二钾0.28-0.32g/L。

可选的，所述发酵培养基的组成成分包括：氯化钠9-11g/L，酵母粉4.5-5.5g/L，胰蛋白胨9-11g/L。

本公开的第三个方面提供所述枯草芽孢杆菌生产的温度敏感型淀粉酶，所述温度敏感型淀粉酶在60℃以上时失去酶学活性。

本公开的第四个方面提供一种生物揭展剂，所述生物揭展剂由包括如下步骤的制备方法制备得到：