[发明专利]一种重组融合蛋白V12‑CD137L的制备方法及应用有效
| 申请号： | 201710571022.7 | 申请日： | 2017-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN107344970B | 公开（公告）日： | 2018-04-20 |
| 发明（设计）人： | 徐娟;何方;洪艳;黄雅丽 | 申请（专利权）人： | 浙江省医学科学院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K38/17;A61P37/02 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司33200 | 代理人： | 高丽敏,韩介梅 |
| 地址： | 310013 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 融合 蛋白 v12 cd137l 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组融合蛋白V12-CD137L的制备方法，其特征在于所述的重组融合蛋白V12-CD137L是由艾滋病病毒gp120蛋白中的与淋巴细胞具有亲和功能的V1V2区与CD137L的功能区结合而成，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，表达重组融合蛋白V12-CD137L的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示；SEQ ID NO.2基因序列通过以下步骤得到V12-CD137L重组融合蛋白：
(1) 人工合成SEQ ID NO.2基因，将融合基因插入大肠杆菌表达系统，获得表达V12-CD137L重组蛋白的重组大肠杆菌；
(2) 将步骤(1)所得重组大肠杆菌进行37℃培养，20-25℃诱导其表达重组蛋白V12-CD137L，获得诱导后的重组大肠杆菌；
(3) 将步骤(2)所得诱导后的重组大肠杆菌进行细胞破碎，通过离心获得重组大肠杆菌破碎上清液；
(4) 将步骤(3)所得重组大肠杆菌破碎上清液通过层析柱进行分离纯化，得到V12-CD137L重组蛋白纯化液；
(5) 将步骤(4)所得V12-CD137L重组蛋白纯化液置于透析袋中，用透析液进行透析，获得稳定的V12-CD137L重组融合蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种重组融合蛋白V12-CD137L的制备方法，其特征在于所述氨基酸序列SEQ ID NO.1中，第1-76位为艾滋病病毒gp120中的V1V2区，第77-283位为CD137L的功能区，所得重组融合蛋白兼具靶向定位淋巴细胞的功能和CD137L蛋白功能。
3.根据权利要求1所述的一种重组融合蛋白V12-CD137L的制备方法，其特征在于所述透析液配方为：甘氨酸1-3克，二硫苏糖醇0.1-0.3克，吐温20 0.5-1克加水溶解定容至1升，调节pH值至7.0-9.0。
4.根据权利要求1所述的一种重组融合蛋白V12-CD137L的制备方法，其特征在于所得V12-CD137L重组融合蛋白能促进淋巴细胞的体外培养的增殖水平，且效果优于单纯的CD137L重组蛋白。
5.根据权利要求1所述的一种细胞免疫蛋白V12-CD137L的制备方法，其特征在于所得V12-CD137L重组融合蛋白能增强体内的细胞免疫水平。
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