[发明专利]蛋黄中多种生物活性物质的联产分离方法

权利要求书

1.蛋黄中多种生物活性物质的联产分离方法，其特征在于，所述多种生物活性物质包括胆固醇、卵磷脂、卵黄高磷蛋白，所述方法步骤如下：

步骤（1）胆固醇的提取：

a. 挑选新鲜禽蛋，洗净、破壳后分离出蛋黄，将蛋黄在45~50℃下干燥至水分含量＜5%，粉碎获得蛋黄粉，采用超临界CO2萃取法提取蛋黄油，剩余物料备用；

b. 蛋黄油中加入体积比为1:2~6的8%β-环糊精-壳聚糖水溶液，在20~45℃下搅拌20~45min，离心后采用热乙醇浸提法从胆固醇-β-环糊精-壳聚糖复合物中分离出胆固醇；

采用超临界CO2萃取法提取出99%的胆固醇及甘油三酯；

步骤（2）卵磷脂的提取：以步骤（1）的所述剩余物料为原料，加入3～12倍体积的80～90%食用乙醇，搅拌均匀后加入0.1~0.4%的提取蛋白酶，在40~50℃下酶解1~2h，离心后获得上层液及蛋黄蛋白，上层液中主要成分是蛋黄卵磷脂，将其在40~48℃下真空浓缩至稠状，得到纯度为87.2%的卵磷脂粗品，使用0℃的乙酸乙酯洗涤卵磷脂粗品后在40~50℃下干燥，蛋黄卵磷脂的纯度提高到90%以上；

（3）卵黄高磷蛋白的提取：在步骤（2）所述的蛋黄蛋白中加入体积比为1:2~10的10%NaCl溶液，调节pH为3.0~6.0，搅拌0.5~2h，离心后获得滤液，将滤液经过截留分子量为10kDa的超滤膜装置进行脱盐，脱去多余的盐分后冷冻干燥获得卵黄高磷蛋白；

所述步骤（1）中蛋黄油萃取条件为萃取釜温度为30℃~46℃，压力为18MPa~38MPa，分离釜温度为40℃~50℃，压力为4MPa~8MPa，连续萃取40~120min，收集蛋黄油；

所述β-环糊精与壳聚糖水溶液采用8%的β-环糊精-壳聚糖水溶液包埋胆固醇，其中β-环糊精与壳聚糖按1~4：1的体积比例混合，包埋温度为20~45℃；

所述步骤（2）中的提取蛋白酶由酸性蛋白酶:木瓜蛋白酶=3:1制得；所述步骤（1）中胆固醇的分离方法具体为：将胆固醇-β-环糊精复合物沉淀以1:2~10的比例加入浓度为95~100%的乙醇，在50~70℃搅拌0.5~2h，之后将热乙醇提取液在0~4℃下静置5~10h，析出胆固醇，经过滤、干燥获得精制胆固醇。