[发明专利]分离纯化非达霉素的方法

说明书

本发明为分离纯化非达霉素的方法，解决已有分离纯化非达霉素的方法存在分离步骤多，生产成本高，回收率较低的问题。本发明所述的方法包括如下步骤：(1)含有非达霉素的粗品用有机溶剂溶解,加入碱溶液洗涤，有机相用干燥剂干燥后,减压浓缩得浓缩物；（2）步骤（1）得到的浓缩物过聚酰胺柱,梯度洗脱,收集含非达霉素的洗脱液,减压浓缩后结晶得到得白色粉末状非达霉素纯品，所得的非达霉素纯度在97%以上，总收率达到75%以上。本发明的方法能够得到高纯度的非达霉素,步骤少，工艺简单易行，收率高,环境友好,非常适合商业化生产。

技术领域

本发明涉及药物化学领域的应用，具体涉及一种高效分离纯化非达霉素的方法。

背景技术

非达霉素（Fidaxomicin）是由多种微生物发酵产生的次级代谢产物，又名台勾霉素B（Tiacumicin B）,其分子式为C₅₂H₇₄Cl₂O₁₈,其主要通过抑制细菌的RNA聚合酶二迅速产生抗难治梭状芽孢杆菌感染（CDI）的作用，优于万古霉素等现有药物，具有更低的复发率。

中国发明专利CN104846043A公开了制备非达霉素的方法，该发明提供了一种从发酵液中分离和纯化非达霉素的工艺,包括：放线菌桔橙指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum hamdenensis亚种NRRL18085菌株发酵结束后,极性有机溶剂浸提菌丝体；浸提液浓缩后过大孔吸附树脂柱,收集含有非达霉素的解析液；解析液浓缩后用有机溶剂萃取；萃取液浓缩后经正向柱层析,得到非达霉素粗品；该粗品经高压制备液相色谱设备,用含水的极性溶剂作为流动相、并添加酸或酸性盐调节pH,收集含有高纯度非达霉素的流出液；该洗脱液过聚苯乙烯微球树脂柱；洗脱液浓缩、萃取、萃取液干燥后浓缩,真空干燥,得白色粉末状非达霉素纯品。该发明经过浸提、大孔树脂吸附、萃取、正向柱层析、苯乙烯微球柱、萃取和真空干燥等七步分离纯化过程，生产周期长，容易造成产品出现降解产物，纯度低，总收率也无法得以提高。

中国发明专利 CN104418925A、CN104098637A和 CN103320355A等专利均描述了采用极性溶剂从微生物菌丝中浸提，大孔树脂分离和制备柱层析等过程进行分离纯化非达霉素的方法。由于微生物发酵过程的复杂性，通常经过溶媒浸提，在分离出目标产物的同时，也将菌丝中的油脂一同提取出来。浸提物进入下一步大孔吸附树脂时，这些油脂会吸附到树脂上，使树脂交换容量大大降低；洗脱非达霉素拖尾严重，不能实现非达霉素与杂质的有效分离，需增加额外步骤除去杂质；再生树脂时将油脂去除需耗费大量溶剂。以上专利均采用了制备柱层析进一步分离非达霉素的杂质，生产成本高，不利于大规模生产。

综上，对于从具有复杂成分的发酵菌丝体中分离纯化非达霉素，要实现步骤少，溶媒低消耗，低成本的目标,仍然是一个期待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种分离步骤少，生产成本低，产品纯度高、回收率高的分离纯化非达霉素的方法。

本发明是这样实现的：

一种分离纯化非达霉素的方法，包括以下步骤：

a.溶解：将含有非达霉素的粗品用有机溶剂充分溶解，过滤后得粗品溶液；

b.洗涤:将适当体积的碱溶液加入步骤a得到的粗品溶液，二者体积比为1:9到7:3；两相充分混合，分层，有机相加入干燥剂干燥后，减压浓缩得浓缩物；

c.层析: 步骤b得到的浓缩物溶解后上样至聚酰胺柱,以有机溶剂水溶液和酸水的混合溶剂梯度洗脱,收集含有非达霉素的洗脱液；流速控制在0.2～2.5BV/h；

d.浓缩及干燥:将分段收集到的含非达霉素洗脱液减压浓缩后结晶，真空干燥得到纯品。