[发明专利]一种基于小麦SSR标记的多重PCR方法在审
| 申请号： | 201710573141.6 | 申请日： | 2017-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN109251991A | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 田再民 | 申请（专利权）人： | 田再民 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 075000 河北省张家口市桥西区*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多重PCR 聚丙烯酰胺凝胶电泳 多重PCR扩增 凝胶电泳图 小麦 扩增产物 小麦品种 小麦种胚 指纹分析 小麦DNA 对引物 条带 检测 应用 保证 | ||
1.一种基于小麦SSR标记的多重PCR方法，其特征是：以16个小麦品种为材料，采用CTAB法提取小麦种胚的DNA，以barc80、cfd72、gwm294、gwm429、gwm261、gwm285、gdm72、gwm67、cfd29、cfd76、wmc603、gwm333共12对引物进行多重PCR扩增，对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测凝胶电泳图在目的条带处是否有产物。
2.如权利要求1所述的一种基于小麦SSR标记的多重PCR方法，其特征在于：多重PCR扩增：选择16个小麦材料的DNA为模板，每组2对SSR引物进行PCR扩增，PCR扩增体系为20μL，其中包括：2.0μL 10×buffer，0.4μL dNTPs(10mM)，0.5μL TaqDNA聚合酶(2U/μL)，两种引物各4.0μL SSR引物(1.25μM)，6.0μL(50-140ng/μL，未去除RNA)模板DNA，3.1μL超纯水，PCR反应在5331型PCR仪上进行，PCR扩增程序为降落式PCR，过程包括两部分，首先，94℃预变性5min，94℃变性30s，65℃-55℃退火45s，每个循环降低0.7℃，72℃延伸45s，重复11个循环；然后，94℃变性30s；55℃退火45s；72℃延伸45s，重复14个循环；在72℃延伸5min。
3.如权利要求1所述的一种基于小麦SSR标记的多重PCR方法，其特征在于：PCR产物分离：取4μL PCR产物与1.5μL上样缓冲液混合94℃变性后在6.0％变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，恒压2000V下，电泳1.5-2.0h，采用简化的硝酸银染色方法染色。
4.如权利要求1所述的一种基于小麦SSR标记的多重PCR方法，其特征在于：多重PCR引物组合评估：利用多重PCR组合分析评估引物间相互作用的情况，通过分析出两对引物各序列间相互作用的最大G值，并用试验进行验证。
5.如权利要求1所述的一种基于小麦SSR标记的多重PCR方法，其特征在于：正交试验设计：对影响PCR反应的Mg2+，TaqDNA聚合酶，dNTPs和引物按四因素三水平L9(34)设计正交试验。
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