[发明专利]一种蜜蜂卵超低温冷冻方法及其配套工具

权利要求书

1.一种蜜蜂卵超低温冷冻方法，其特征在于，包括下述步骤：

(1)蜂卵获取：将蜂王装入蜂王产卵控制笼内，送入蜂群，囚禁蜂王控制笼内产卵，次日取出产有蜂卵的台基条备用；

(2)蜂卵收集：将产有蜜蜂卵的台基条固定到木质支架上，用滴管吸取预先配制好的生理液，逐滴滴加到粘有蜂卵的台基上，将卵覆盖，用卵的塑料剥离针在20倍体式显微镜下将生理液内的蜂卵逐粒剥离台基，使卵悬浮于液体内，再将该台基条立于一洁净培养皿内，用吸有生理液的滴管将剥离的蜂卵全部冲入培养皿内，逐条冲洗，将所有蜂卵都收集到该培养皿内；

(3)蜂卵渗透平衡：用滴管吸取培养皿内收集到一起的蜂卵，将其加入到平衡漏斗内，打开止水夹，生理液流出至废液皿，关闭止水夹，依次加入适量的蜂卵梯度渗透液一，分别渗透处理一定时间，使蜂卵脱水和渗透平衡，最后加入蜂卵冷冻保护液继续平衡；

(4)蜂卵冻前准备：在3L的广口玻璃内胆保温瓶内加入一定量制冷的液氮，将玻璃化冷冻滴冻盘悬于液氮之上，通过调节提钩位置，使盘体距离液氮面适当高度位置，降温平衡后用于蜂卵的滴冻；

(5)蜂卵滴冻：用滴管吸取悬有蜂卵的冷冻保护液，逐滴滴入玻璃化冷冻滴冻盘上的圆形凹陷内，冷冻保护液会迅速冷冻进入玻璃化状态；

(6)蜂卵集中冻存：将玻璃化冷冻的蜂卵集中入冻存管内密封并标记，投入到液氮内长期保存；

(7)蜂卵解冻与复水：取出装有蜂卵的冻存管，升温平衡一定时间后，将玻璃态颗粒投入解冻液内，迅速解冻，再将悬浮有蜂卵的解冻液转移入平衡漏斗内，将蜂卵集中，依次加入适量的蜂卵梯度渗透液二，分别渗透处理一定时间，使蜂卵吸水和渗透复原，最后加入蜂卵生理液继续复水；

(8)蜂卵移植和培养：用配有进样器的塑料吸持针吸持住经过检验合格的蜜蜂卵的头部，将其移动并立于台基条的台基上，所有蜂卵移植完毕后，将台基条固定到蜂卵培养盒内，并将培养盒置于恒温恒湿培养箱中，调节适宜的温湿度进行蜂卵培养；

所述木质支架的上部中间开具一条长130mm、宽3.5mm、深5.0mm的凹槽；卵的脱水/复水平衡装置包括平衡漏斗、漏斗架、筛网、滴管、止水夹和废液皿，所述平衡漏斗固定在漏斗架上，所述筛网安装在平衡漏斗内，所述止水夹固定在平衡漏斗的底部，所述漏斗架的底部放置在废液皿内；所述玻璃化冷冻滴冻盘包括盘体、提柄和提钩，所述提柄连接于盘体的侧面，所述提钩滑动连接在提柄的下部，所述盘体上设有若干圆形凹陷；所述圆形凹陷的直径为6mm；所述蜂卵培养盒包括盒体和固定架，所述盒体的一侧设有开口，所述固定架竖直固定在盒体的内壁上，且固定架上设有若干用于卡接台基条的卡口；所述盒体的侧面形状为梯形；所述固定架的数量为2个。