[发明专利]一种高效、快速制备分离三种人参皂苷异构体Rk2、Z型和E型Rh3的方法

说明书

本发明公开了一种高效、快速制备分离三种人参皂苷异构体Rk2、Z型和E型Rh3的方法。三种皂苷混合物的制备方法为：以人参皂苷Rg3为原料，以含酸的醇水溶液为反应体系，进行加热脱水反应，以二氧化铅为催化剂。三种皂苷混合物的分离方法为：采用高速逆流色谱法分离，以乙酸乙酯‑乙醇‑水‑乙酸(体积比4:1:6:0.08)为溶剂系统。本发明提供的制备人参皂苷异构体Rk2、Z型和E型Rh3混合物的方法得率高，90％以上的人参皂苷Rg3均转化为Rk2、(Z)‑Rh3和(E)‑Rh3，原料利用率高；本发明提供的高速逆流分离该人参皂苷异构体Rk2、Z型和E型Rh3混合物的方法分离效率高，分度度好，可以有效将三种异构体分离，单次分离即可获得三种异构体的质量各在90mg以上。

技术领域

本发明属于药物制备领域，涉及天然产物异构体的分离制备，具体涉及一种高效、快速制备分离三种人参皂苷异构体Rk2、Z型和E型Rh3的方法。

背景技术

达玛烷型人参皂苷的C20位多具有羟基，广泛存在于人参属植物，且含量较多。经加热处理后，达玛烷型皂苷及其苷元的C20位羟基易发生脱水反应，形成双键，生成双键异构的系列C20位脱羟基达玛烷型稀有人参皂苷及其苷元。

CN102911238A公开了如下反应式：

但实际上，脱水产物还包括D结构的稀有人参皂苷，其化学式如下：

稀有人参皂苷B、C、D为同分异构体，B与C或D的双键位置不同，C与D为同一位置双键的顺式和反式异构体。这三个同分异构体的极性相似，分离难度大。

CN103193846A公开了一种制备人参皂苷Rk3和人参皂苷Rh4顺反异构体的方法。人参皂苷Rk3和人参皂苷Rh4顺反异构体的化学结构式如下：

制备方法包括：(1)硅胶柱层析得人参皂苷Rk3和Rh4粗品；(2)反相制备液相制备得到人参皂苷Rk3与Z型Rh4的混合品、精制E型人参皂苷Rh4；(3)高速逆流分离人参皂苷Rk3与Z型Rh4混合品得精制人参皂苷Rk3和精制Z型人参皂苷Rh4。该申请指出，在大量制备三种化合物的单体纯品时，反相柱色谱无法将人参皂苷Rk3与Z型Rh4有效分离，而高速逆流虽然可以将人参皂苷Rk3与Z型Rh4分开，却无法仅通过高速逆流就将三者分离。

人参皂苷异构体Rk2、Z型和E型Rh3是另一组由达玛烷型皂苷的C20位羟基发生脱水形成的同分异构体稀有皂苷，化学结构式如下：

有研究表明，Rk2、Z型和E型Rh3存在不同药理作用，但是由于标准品获得难度大，无法大量制备，限制了研究者对其活性进一步深入研究。虽然上文提及的CN102911238A公开了一种制备Rk2、Rh3的方法，但是该方法收率低(不到20％)；另外，现有技术也没有公开如何大量(此处大量指单次分离获得三种异构体各100mg左右)分离Rk2、Z型和E型Rh3。

总之，大量获得人参皂苷Rk2、Z型和E型Rh3标准品的难度较大。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术不足，提供一种高效、快速、大量制备分离人参皂苷异构体Rk2、Z型和E型Rh3的方法；该方法不仅产物得率高，而且可以有效将三种异构体分离，单次分离即可获得三种异构体的质量各在90mg以上。

本发明通过下面的技术方案得以实现：

一种制备人参皂苷异构体Rk2、Z型和E型Rh3混合物的方法，以人参皂苷Rg3为原料，以含酸的醇水溶液为反应体系，进行加热脱水反应，创新点在于：以二氧化铅为催化剂进行非均相脱水反应，反应结束后先滤除催化剂再进行浓缩即得。

优选地，所述醇水溶液优选甲醇、乙醇的水溶液，体积百分浓度为40-60％。