[发明专利]芯芭中环烯醚萜（苷）类化合物的快速分离、分析方法及其在降糖药物中的应用

说明书

本发明公开了一种芯芭中环烯醚萜(苷)类化合物的快速分离、分析方法及其在降糖药物中的应用，对芯芭采用混合溶剂直接萃取，利用NMR技术定性和定量分析芯芭提取物中环烯醚萜(苷)类化合物的含量，解决了现有技术中的提取分离效率低、药效组分含量测定误差较大及步骤繁琐的技术问题。本发明分离的含有环烯醚萜(苷)类化合物的提取物具有显著的体内降糖效果，在STZ、四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠模型中，能显著改善糖尿病小鼠的糖耐受，可以在降糖药物制备中应用。

技术领域

本发明属于中药学领域，涉及芯芭活性组分环烯醚萜(苷)类化合物(即环烯醚萜及环烯醚萜苷类化合物总称)的分离、分析及其在制备降糖药物中的应用。

背景技术

芯芭，蒙药名“阿拉坦-阿给”，是玄参科(Scrophulariaceae)植物达乌里芯芭(Cymbaria dahurica L.)和蒙古芯芭(Cymbaria mongolica Maxim.)的干燥全草。《中华本草》蒙药卷记载芯芭已有七百多年应用历史，在四味芯芭散、八味芯芭散等经典蒙药处方中做主药或配方使用。李旻辉等发现芯芭正丁醇提取物能够剂量依赖的降低四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠血糖水平，而芯芭水提取物和低剂量正丁醇提取物对血糖影响较小。武小兰等人的研究表明高剂量芯芭正丁醇提取物组小鼠的空腹胰岛素水平(FINS)明显高于模型组小鼠 (P0.05)，而低剂量正丁醇组和水剂量组小鼠对FINS影响较小。提示芯芭正丁醇提取部分可能含有降糖活性组分，但是提取方法复杂和药效物质含量不清楚等限制了其进一步应用。

有文献报道以梓醇为代表的环烯醚萜(苷)类化合物有较好的降糖效果，可能是芯芭中的降糖活性物质。然而现有技术、方法对于环烯醚萜(苷)类化合物的分离和分析均费时、费力。如王鸿宇等采用95％乙醇回流后热水分散，再用正丁醇萃取。HPLC于210nm 处外标法检测含量。该提取方法适合于天然产物中的小分子化合物的分离，针对性较差，提取方法复杂、总效率低。同时，因为环烯醚萜(苷)类化合物特殊的结构，定量分析的难度非常大：如用外标法则需要每一种环烯醚萜(苷)类化合物的标准样品，难度极高；如用内标法，则因为其紫外吸收较弱，误差很大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种芯芭中环烯醚萜类化合物的快速分离、分析方法及其在降糖药物中的应用。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种芯芭中环烯醚萜(苷)类化合物的快速分离、分析方法，包括以下步骤：

1)分离：将芯芭粉碎，得芯芭粉；将芯芭粉用由乙酸乙酯、丙酮及甲醇组成的混合溶剂超声提取，提取完毕后过滤，得提取液，所述混合溶剂中乙酸乙酯:丙酮:甲醇的体积比为1:(0.2～0.6):(0.2～0.6)；将提取液依次经浓缩、冷冻干燥，得到芯芭提取物；

2)分析：将芯芭提取物溶解于氘代试剂后再加入内标物，制备得到分析样品，然后采用NMR中的氢共振频率对分析样品采样，完成样品分析；

3)根据采样得到的氢共振信号，选取与环烯醚萜(苷)类化合物的特征结构对应的信号峰和内标物的特征信号峰，采用内标法定量计算环烯醚萜(苷)类化合物的含量。

所述超声提取的条件为：提取温度为20～60℃，提取时间为15～60min，超声功率为 60～200W；所述混合溶剂用量以100g芯芭计为400～1000mL。

所述浓缩的条件为：温度为30～60℃，压力为-0.08～-0.1MPa，浓缩至无溶剂流出为止；所述冷冻干燥的条件为：冷冻温度为-80～-20℃，干燥真空度为-0.09～-0.1MPa。

所述氘代试剂选自CDCl₃、DMSO-d₆、CD₃OD、CD₃COCD₃或THF-d₈，分析样品制备中，氘代试剂用量为0.3～0.6mL，芯芭提取物用量为5～100mg。