[发明专利]一种生产4-HP的菌株及高产量4-HP的制备方法

权利要求书

1.一种副偶然分枝杆菌(Mycobacterium parafortuitum)菌株BK12，已保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号是CCTCC NO.M2017084。

2.一种含权利要求1所述的副偶然分枝杆菌菌株BK12的菌剂，其特征在于，还包括所述菌株生长的培养基。

3.一种4-HP的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括使用权利要求1所述的副偶然分枝杆菌菌株BK12或权利要求2所述的副偶然分枝杆菌菌株BK12的菌剂。

4.根据权利要求3所述的4-HP的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将权利要求1所述的副偶然分枝杆菌菌株BK12或权利要求2所述的副偶然分枝杆菌菌株BK12的菌剂接种到种子培养基中扩大培养，得到扩大培养液；

(2)接种所需量的步骤(1)中得到的扩大培养液到发酵培养基中，通过微生物转化发酵生产4-HP。

5.根据权利要求4所述的4-HP的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，接种的所述扩大培养液中菌种的密度为OD600：5.0-12.0，所述扩大培养液的接种量为所述发酵培养基体积的5-15％。

6.根据权利要求4-5任一项所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述种子培养基包括如下重量份的组分：碳源0.5-5重量份和氮源0.2-8重量份。

7.根据权利要求4-5任一项所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述扩大培养的条件为：控制温度28-33℃，搅拌转速100-500rpm，pH 6.5-7.5，培养时间48-60h。

8.根据权利要求4-5任一项所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基包括如下重量份的组分：甾醇0.5-5重量份、碳源0.1-3份、氮源0.1-6重量份、无机盐0.01-1重量份和水65-97.29重量份。

9.根据权利要求8所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述甾醇为植物甾醇和/或动物甾醇。

10.根据权利要求8所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基还包括植物油2-20重量份。

11.根据权利要求10所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述植物油包括大豆油、玉米油、花生油、菜籽油和葵花油中的一种或几种的混合物。

12.根据权利要求4-5任一项所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述碳源包括葡萄糖、糖蜜、甘油、麦芽糖和可溶性淀粉中的一种或几种的混合物；所述氮源包括酵母膏、蛋白胨、玉米浆、大豆粉和硫酸铵中的一种或几种的混合物；所述无机盐包括镁盐、磷酸盐、钠盐和硝酸盐中的一种或几种的混合物。

13.根据权利要求4-5任一项所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基包括葡萄糖0.5-2.0重量份、酵母膏0.2-0.5重量份、蛋白胨0.2-0.5重量份、玉米浆2.5-4.0重量份、磷酸二氢钾0.02-0.08重量份、硝酸钠0.02-0.6重量份、大豆油8-18重量份和植物甾醇1-3重量份。

14.根据权利要求4-5任一项所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述微生物转化的发酵条件为：控制温度28-35℃，pH 5.5-8.5，通气量0.05-1vvm，搅拌转速100-500rpm，发酵时间72-200h。

15.根据权利要求14所述的4-HP的制备方法，其特征在于，所述微生物转化的发酵条件为：控制温度30-32℃，pH 6.8-7.5，通气量0.1-0.5vvm，搅拌转速200-400rpm，发酵时间72-200h。

16.一种如权利要求1所述的副偶然分枝杆菌菌株BK12或权利要求2所述的含所述的副偶然分枝杆菌菌株BK12的菌剂在制备黄体酮、17α-OH黄体酮、氢化可的松、倍他米松、地塞米松、可的松、氟美松和依普利酮中的应用。