[发明专利]一株芽孢杆菌Bacillus sp.菌株及其应用

说明书

一株芽孢杆菌Bacillus sp.菌株及其应用，属微生物技术领域。该菌株已于2017年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。分类命名为：芽孢杆菌Bacillus sp.，保藏编号为13725。通过从紫茎泽兰的寄生昆虫泽兰实蝇唾液腺筛分出该菌株，能够高效快速地对紫茎泽兰发生生物侵染，可显著抑制紫茎泽兰的种子萌发，并且在适宜环境下造成紫茎泽兰幼苗病变。菌株的应用是以其为活性成分或活性成分之一制成菌剂防控紫茎泽兰。是在紫茎泽兰防控领域有着良好应用前景的菌株。

技术领域

本发明属微生物技术领域，具体涉及一株芽孢杆菌菌株及其应用。

技术背景

紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum)，菊科泽兰属，多年生草本或亚灌木，是一种世界性的恶性杂草，由于其能够快速形成单优群落，并且可以多种方式抑制其它植物生长，是我国现存危害最大的一种外来植物，由于其含有多种有毒组分及恶臭气味组分，仅有泽兰实蝇等极少数物种对其有采食现象。近年来人们对紫茎泽兰的治理采取了投放专性天敌、除草剂、植物防控等手段但均收效甚微，因此很有必要针对紫茎泽兰研发一种有效、成本低廉的生物防治措施。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效、低成本、使用方便的微生物药剂控制紫茎泽兰，具体是提供一株芽孢杆菌(Bacillus sp.)菌株及其在防治紫茎泽兰中的应用。

本专利申请人通过从紫茎泽兰的寄生昆虫泽兰实蝇(Procecidochares utilisStone)唾液腺筛分出该菌株，能够高效快速地对紫茎泽兰发生生物侵染，可显著抑制紫茎泽兰的种子萌发，并且在适宜环境下造成紫茎泽兰幼苗病变。

本发明所提供的菌株为芽孢杆菌(Bacillus sp.)菌株，专利申请人对菌株的编号为ZLSY5。该菌株已于2017年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。分类命名为：芽孢杆菌Bacillus sp.，保藏编号为13725(保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.13725)。

本发明所提供的菌株的应用是以其为活性成分或活性成分之一制成菌剂防控紫茎泽兰。

专利申请人提供的上述ZLSY5菌株，是芽孢杆菌属中首次证实能够高效侵染并造成紫茎泽兰种子无法正常萌发，且会导致萌发中紫茎泽兰种子根部病变的菌株，是在紫茎泽兰防控领域有着良好应用前景的菌株。

本发明通过从云南野外紫茎泽兰上泽兰实蝇的唾液腺内分离出一株芽孢杆菌Bacillus sp.菌株，可在自然环境下快速侵染紫茎泽兰种子使其无法正常萌发或者萌发根快速畸变导致萌发终止，是一种具有良好效果及开发研究远景的微生物。

本菌株的生物学特性研究如下。

将菌株接种在LB培养基上并于28℃恒温培养，3d。

形态学观察：挑取单菌落于载玻片上涂片后，用结晶紫对供试菌株染色，观察细菌形态特征。用大肠杆菌做对照，进行革兰氏染色。直接在培养基上观察其菌落特征。

分子生物学鉴定

分子鉴定

菌株DNA的获取：在无菌的环境中，挑供试菌株菌落在20μL无菌水，充分混匀，置于100℃金属浴3h(半小时摇晃一次)裂解细胞，12000g离心1min去除菌体，吸取上清，置于-20℃冰箱保存备用。

核糖体16S rDNA-V4区段扩增：以细菌基因组DNA为模板进行PCR扩增，引物由昆明擎科生物公司合成。PCR扩增反应在30μL反应体系中进行(见下表)。

引物：16S V4 515F 5′-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3′