[发明专利]一种款冬花液相指纹图谱的构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种款冬花HPLC指纹图谱的构建方法和应用，涉及指纹图谱的构建技术领域。本发明液相指纹图谱的构建方法包括如下步骤：(1)款冬花经甲醇提取后过滤膜得测试溶液；(2)经高压液相色谱仪检测得化学指纹图谱；(3)经图谱分析确定款冬花液相指纹图谱中包含14个特征峰。本发明样本前处理简洁、方便、重现性好，且能准确反映款冬花药材的整体质量特征，用于款冬花药材的质量控制。

技术领域

本发明涉及柱色谱法，特别涉及一种款冬花液相指纹图谱的构建方法及其在质量检测中的应用。

背景技术

款冬花为我国传统中药材，具有润肺下气，止咳化痰的功效，含有苯丙素类、萜类、黄酮类、甾体类、生物碱、挥发油等成分。现行的《中国药典》对款冬花质量控制方法较为简单，仅以款冬酮含量作为药材质量评价的单一指标，而单一指标的测定难以真正从整体上反映药材质量。

指纹图谱技术作为一种多组分化学成分样品的有效质量控制方法，能够从整体上反映出待测样品的整体性、特征性，目前被广泛应用于中草药的质量控制。王福刚等(蜜炙款冬花HPLC指纹图谱研究，中药材,第35卷第1期,2012)对蜜炙款冬花指纹图谱进行了研究，共确定13个共有峰，但仅指认了芦丁；杨秀伟等(款冬花药材的HPLC化学成分指纹图谱研究，药学学报,第44卷第5期,2009)建立了款冬花药材的化学成分指纹图谱，确定25个共有峰，但是所指认的16个特征峰中酚酸类成分较少，而这类成分与款冬花止咳祛痰作用密切相关。所以，为了准确评价款冬花药材质量，需要建立一种能全面反映包括酚酸类成分在内的指纹图谱。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种能全面反映酚酸类成分的款冬花液相指纹图谱的构建方法及其在质量检测方面的应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种款冬花液相指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

(1)测试溶液的制备：取款冬花粉末0.8-1.2g，加入75％甲醇20-25mL，超声提取0.5-1h，以75％甲醇补足损失重量，溶液过0.22μm微孔滤膜即可；

(2)吸取测试溶液至高效液相色谱仪测定，得到化学指纹图谱；所述液相色谱条件：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25℃-35℃；进样量：1-20μL；流速：0.8-1.2mL/min；紫外检测波长：0-42min以240-326nm检测；42-80min以210-230nm检测；流动相：A相为0.01％-0.1％甲酸乙腈，B相为0.01％-0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱，每1次进样完成后，系统平衡5min后再次进样。

所述步骤(1)中取款冬花粉末1.0g，加入75％甲醇为20mL，超声提取时间为1h。

所述步骤(2)中液相色谱条件为：柱温：25℃；进样量：10μL；流速：1mL/min；流动相：A相：0.03％甲酸乙腈，B相：0.03％甲酸水溶液。

所述步骤(2)中检测波长：254nm/220nm切换检测；所述指纹图谱有14个特征峰，以12号峰为参照峰，相对保留时间：

1号峰：0.22±0.07；2号峰：0.26±0.03；3号峰：0.27±0.10；4号峰：0.41±0.01；5号峰：0.44±0.02；6号峰：0.48±0.16；7号峰：0.50±0.08；8号峰：0.53±0.10；9号峰：0.73±0.03；10号峰：0.74±0.17；11号峰：0.78±0.01；13号峰：1.23±0.13；14号峰：1.40±0.09。

所选的14个特征峰所对应的化合物分别是：