[发明专利]miRNA、组合物及其在诊断疾病中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及疾病诊断领域，具体涉及miRNA、组合物及其在诊断疾病中的应用，更具体的涉及miR-942-5p、miR-1262及他们的组合物在诊断心肌梗死中的应用。

背景技术

近期研究表明，miRNA参与30％-50％基因的转录和表达调控，在心血管系统的生理和病理机制中都发挥非常重要的作用。现有报道显示miRNA参与了心血管重塑的不同病理过程中，包括心肌肥大、纤维化、心肌功能改变以及血管新生等，由于miRNA的变化早于基因和蛋白的改变，亦早于疾病症状的出现，由此检测miRNA的动态变化，有可能为疾病的发生、发展提供线索，进而指导临床早期干预，有效控制疾病发展。急性心肌梗死(AMI)是最严重的一种心血管疾病，早期、准确的诊断可以保证再灌注治疗的立即开始可能减少死亡率。一些生物标志物如心肌肌钙蛋白I已应用与诊断AMI，可提高目前诊断，为急性心肌梗死的新方法。以往的研究表明miR-30a是与心肌肥厚相关，可作为诊断急性心肌梗死生物标志物的潜在临床价值，但是这些还远远不够，临床的精准诊断和治疗需要更多候选分子标志物。

本发明基于高通量测序方法，获得心肌梗死miRNA的表达数据，同时，结合GEO数据库中心肌梗死相关miRNA数据，进行生物信息学分析验证，从候选的miRNA中挑选出miR-942-5p和miR-1262进行分子生物学验证，结果显示，miR-942-5p和miR-1262与心肌梗死密切相关。可单独或合并用于心肌梗死的临床诊断及预防检测，为临床上相关诊断试剂研发奠定基础。

发明内容

检测miRNA的制剂在制备诊断心肌梗死试剂中的应用，所述miRNA选自下列中的一种或几种：miR-942-5p、miR-1262。

所述miR-942-5p的序列见序列表SEQ ID NO 1。

所述miR-1262的序列见序列表SEQ ID NO 2。

优选的，联合检测miR-942-5p和miR-1262的制剂在制备诊断心肌梗死试剂中的应用。

进一步，诊断心肌梗死试剂包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测样本中miR-942-5p和/或miR-1262。

优选采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中miR-942-5p和/或miR-1262的转录。

所述的样本为外周血。

进一步，样本中miR-942-5p和/或miR-1262高表达显示患心肌梗死风险增加。

优选的，基于定量PCR方法包括特异性扩增miR-942-5p和/或miR-1262的引物，进一步优选，特异性扩增miR-942-5p的引物序列为SEQ ID NO 3，特异性扩增miR-1262的引物序列为SEQ ID NO 4；基于探针杂交方法包括与miR-942-5p和/或miR-1262的核酸序列杂交的探针。

进一步，所述miRNA为miR-942-5p和/或miR-1262的前体，前体序列为SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6。

本发明的目的在于提供下调miR-942-5p和/或miR-1262的转录和/或抑制miR-942-5p和/或miR-1262的活性的试剂在制备防治心肌梗死制剂中的应用。

优选的，采用反义寡核苷酸、antagomiRs、miRNA海绵、miRNA Erasers、Target Masking和/或多靶点反义寡核苷酸的方法下调miR-942-5p和/或miR-1262的转录和/或阻断miR-942-5p和/或miR-1262的活性。

本发明的目的在于提供检测miR-942-5p和/或miR-1262的靶基因制剂在制备诊断心肌梗死制剂中的应用。

所述靶基因为DIANA-MICROT、MICRORNA.ORG、MIRDB、RNA22-HAS、TARGETMINER、TARGETSCAN-VERT数据库表明miR-942-5p和/或miR-1262的靶基因。

定义：

现阶段检测miRNA的表达水平的方法主要包括基于高通量测序技术、基于核苷酸杂交和基于PCR的miRNA检测方法。基于探针杂交技术的miRNA检测方法是一种直接检测法，不需要对样本RNA进行预扩增，包括northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术等技术。

(1)Northern杂交