[发明专利]一种抗人DLL4单克隆抗体与海兔毒素衍生物MMAE的偶联物

说明书

技术领域

本发明是抗体偶联药物领域。具体来说，本发明涉及抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01偶联小毒素分子海兔毒素衍生物MMAE的偶联物。

背景技术

DLL4(Delta like 4)是Notch信号通路中Notch受体的一个重要配体，DLL4通过与相邻细胞表面Notch受体的结合，参与调控毗邻细胞的增殖、凋亡、分化以及干细胞增殖和更新等生物学过程。此外DLL4在人类肿瘤组织中过表达，并参与肿瘤血管的发生发展，到目前为止，人们先后在肾癌、膀胱癌、结肠癌、脑瘤和乳腺癌等肿瘤血管中均观察到DLL4的过表达。近年来多项研究发现，DLL4/Notch信号通路在肿瘤发生、肿瘤血管生成以及肿瘤干细胞的增殖与更新等肿瘤发生发展过程中发挥了重要作用。可见，DLL4有望成为研究肿瘤发生机制及开发相关诊断试剂的新颖靶标，以此开发的特异性抗体及其肿瘤干细胞治疗方法具有良好的应用前景。

抗肿瘤的单克隆抗体通过化学修饰与小分子毒素偶联，这些偶联物既有特异性识别肿瘤抗原的能力，也保留了毒素分子杀伤肿瘤细胞的毒性，靶向于肿瘤部位，选择性杀伤肿瘤细胞。目前国内尚无抗人 DLL4抗体药物偶联物相关专利及文献报道，仅有少量将二肽接头缬氨酸-瓜氨酸(Val-Cit，vc)及影响微管聚合的海兔毒素衍生物MMAE((Monomethyl Auristain E)接头及药物组合应用于抗体药物偶联的报道 (专利号：CN 103145847 B；CN 103254317 B；CN 103394083 A；CN 1938046 B；CN 102936281 B)。因此，发明人希望能够将抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01与一种毒素小分子药物偶联，充分利用抗体的靶向性和毒素小分子的毒性，提高疗效，减少毒副作用。

海兔毒素衍生物MMAE((Monomethyl Auristain E)是一种人工合成的具有高毒性的微管蛋白抑制剂，其与海兔毒素类似都能抑制细胞分裂，与maleimidocaproyl-dipeptide(valine-citrulline or vc)接头连接后，其毒性是阿霉素的10-1000倍。由于MMAE毒性较高且无选择性，因此其没有作为药物单独进行癌症治疗。为了降低毒性以及提高选择性，将MMAE通过linker与抗体偶联，利用抗体的靶向性，提高疗效，减少毒副作用。

基于上述理论基础与科研实践，本发明将已具有自主知识产权的抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01 与MMAE通过valine-citrulline接头连接，设计一种新型抗体药物偶联物MvM03。MvM03的设计开辟了一种新的肿瘤治疗策略。该研究方案发挥抗体靶向性优势，有效降低毒素药物产生的毒副作用，在临床前研究与临床安全性评价中将会占据制高点。因此，具有自主知识产权的抗体药物偶联物MvM03的开发，为肿瘤治疗体系提供新颖的临床用药方案。

发明内容

发明目的

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种特异型强，纯度较高的抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01与海兔毒素衍生物MMAE偶联的抗体药物偶联物MvM03及其制备方法和应用，本发明选取Val-Cit及MMAE的接头及药物组合与抗人DLL4抗体进行偶联，获得其抗体药物偶联物MvM03，促进 MMAE的肿瘤靶向性，提高疗效，降低毒副作用。本发明所使用的抗体已申请专利(专利号： CN105384818A)，同时在偶联工艺中使用膦类还原剂三羧乙基膦TCEP(Tris-(2-carboxyethyl)-phosphine hydrochloride)进行抗体的还原。相较于Pinatuzumab vedotin及相关专利文件(专利号：EP 2478912 A1.) 提供的偶联工艺中所使用的硫醇类还原剂二硫苏糖醇(DTT)，TCEP能在较宽的PH范围内使用且反应条件较为温和、溶解性好、毒性小，同时TCEP不与蛋白质中的其他功能基团反应。基于此，本申请还对偶联工艺进行了进一步的优化，制备出平均偶联比为4.5左右、裸抗组分低于10％，单体含量大于90％，且体内外药效证实能特异性杀伤靶细胞的抗人DLL4抗体的抗体偶联药物。

技术方案

本发明的技术方案在于提供一种抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01与海兔毒素衍生物MMAE偶联的抗体药物偶联物，其特征在于：抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01与海兔毒素衍生物MMAE的抗体药物偶联物。所述偶联物的制备步骤包括：