[发明专利]一种化学发光试剂稳定剂的筛选方法

说明书

本发明涉及一种化学发光试剂稳定剂的筛选方法，采用一类结构的吖啶磺酰胺，通过过氧化氢定量测定方法来考察不同稳定剂对过氧化氢的消耗能力，所述的稳定剂包括BSA、还原性氨基酸如甘氨酸、赖氨酸、组氨酸等，柠檬酸、TRIS缓冲液等具备还原性的物质。该方法极大地节省了筛选试剂稳定剂的工作强度和时间，检测快速高效，每次检测只需要几分钟即可完成，给化学发光试剂稳定剂的选择和用量上提供了参考依据。

技术领域

本发明涉及一种化学发光试剂稳定剂的筛选方法，属于化学分析技术领域。

背景技术

化学发光发光免疫分析是将化学发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术，它具有选择性好、灵敏度高、特异性强、无放射性危害、分析速度快、设备简单等优点，在环境、临床、食品、药物检测等领域得到了广泛应用，成为免疫分析方法的研究热点和发展趋势。

吖啶化合物作为一种化学发光免疫分析试剂的标记物，在化学发光发光免疫分析中得到了广泛的应用。吖啶化合物跟其他标记物(如放射元素标记、酶标记)相比，有许多重要优势，比如相对高的灵敏度，低成本、线性范围宽，相对简单的信号检测设备等。

尽管吖啶化合物在化学发光免疫分析的使用中有诸多优势，但仍存在一些问题，尤其是此化学发光信号启动是由一个氧化反应启动的，而液体试剂中一些偶然的氧化剂如过氧化氢等的存在(例如试剂中的表面活性剂会自动生成过氧化氢，一些液体里本身也有少量的过氧化氢，另外试剂在生产、运输、储存的过程中也会产生过氧化氢)，对吖啶标记物有一个去稳定的作用。另外，化学发光免疫分析方法中使用的各种稳定试剂的组分，如免疫球蛋白、白蛋白等，含有氧化敏感的氨基酸如半胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸等，也能被过氧化氢氧化从而生物活性消失或改变。

上述吖啶标记物或蛋白质活性的改变会导致试剂检测结果的准确性降低，因此，在优化试剂组分时有必要去除一些偶然的氧化剂如过氧化氢，但是现有技术在过氧化氢消耗试剂的选择和用量上尚没有参考依据，通常需要实时添加稳定剂以考察试剂的实时稳定性来考察稳定剂的过氧化氢消耗能力，但这需要长达数月甚至一到两年时间，因此需要建立一种快速测量方法来考察稳定剂的过氧化氢消耗能力，预先筛选出过氧化氢消耗能力合适的化学发光试剂稳定剂，为试剂稳定性研究提供指导依据。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：为解决现有技术在过氧化氢消耗试剂的选择和用量上无参考依据的技术问题，提供一种化学发光试剂稳定剂的筛选方法，该方法通过对各种化学发光试剂稳定剂对过氧化氢的消耗能力进行检测，根据检测结果选择过氧化氢消耗能力合适的化学发光试剂稳定剂，极大地节省了筛选化学发光试剂稳定剂的工作强度和时间。

本发明为解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种化学发光试剂稳定剂的筛选方法，包括以下步骤，

选定若干种稳定剂；

取体积为V1的一系列的C0-C1浓度范围的过氧化氢标准溶液，分别向其中加入高纯水和体积为V2、浓度为C2的化学发光检测试剂，并立即加入体积为V3、浓度为C3的激发液，分别收集一段时间内的总光子数，通过总光子数与过氧化氢标准溶液的浓度之间的对应关系得到标准曲线；

取与建立标准曲线时相同体积的C0-C1浓度范围内某一浓度的过氧化氢标准溶液若干份，份数至少为比稳定剂数量多1份，向其中一份过氧化氢标准溶液中加入与建立标准曲线过程中高纯水体积相同的高纯水，其余份过氧化氢标准溶液中加入与建立标准曲线过程中高纯水体积相同的某一种稳定剂，分别进行温育后,再分别加入体积为V2、浓度为C2的化学发光检测试剂，并立即加入与体积为V3、浓度为C3的激发液，分别收集与建立标准曲线过程中相同时间内的总光子数；将加入某一种稳定剂和高纯水后所测总光子数与建立的标准曲线进行比照，分别得到加入每一种稳定剂后的过氧化氢浓度C＇和未加稳定剂的过氧化氢浓度C，根据公式降解率(H2O2)＝(C-C＇)/C*100％，计算得到每一种稳定剂的过氧化氢降解率；