[发明专利]一种高效石斑鱼精子冷冻保存液及其使用方法

权利要求书

1.一种石斑鱼精子冷冻保存液，其特征在于：包括稀释液和抗冻剂；

所述稀释液为水溶液，所述稀释液中含有以下质量浓度的组分：葡萄糖15g/L、氯化钠8g/L、氯化钾0.65g/L；

所述抗冻剂为1,2-丙二醇，所述抗冻剂在所述保存液中的体积浓度为15%。

2.根据权利要求1所述的石斑鱼精子冷冻保存液，其特征在于：

所述保存液的pH值为7~8，所述保存液的渗透压为322.28~420.69mOsm/L。

3.根据权利要求1或2所述的石斑鱼精子冷冻保存液保存精子的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）稀释液的配制：取葡萄糖、氯化钠和氯化钾，溶解在蒸馏水中，制成稀释液；

2）保存液的配制：取1,2-丙二醇，添加至步骤1）所得稀释液中，制成精子冷冻保存液；

3）保存液的预冷：将步骤2）所得冷冻保存液放置于4℃下预冷；

4）精液的稀释：取石斑鱼精液，将精液与保存液按照1:1~1:1.5的体积比混合，摇匀；

5）平衡和分装：将步骤4）所得稀释后的精液在室温下平衡5~10min，分装，得小装精液；

6）冷冻保存：将步骤5）所得小装精液置于-140~-150℃的液氮蒸气中冷却10~15min，然后，浸入液氮中冷冻保存；

7）解冻和受精：将步骤6）所得保存后的小装精液从液氮中取出，于37~38℃下解冻，受精。

4.根据权利要求3所述的石斑鱼精子冷冻保存液保存精子的使用方法，其特征在于：

所述步骤5）中，分装时采用2mL的冷冻管，每个冷冻管盛装1.0~1.6mL稀释后的精液。

5.根据权利要求4所述的石斑鱼精子冷冻保存液保存精子的使用方法，其特征在于：

所述步骤6）中，每5~10个冷冻管为一组，利用小布袋包装，然后，置于液氮蒸气中冷却。

6.根据权利要求3所述的石斑鱼精子冷冻保存液保存精子的使用方法，其特征在于：

所述步骤7）中，在显微镜下观察解冻后精子的活力，活力达到75~85%，用于受精。

7.根据权利要求6所述的石斑鱼精子冷冻保存液保存精子的使用方法，其特征在于：

所述步骤7）中，受精时，精液与鱼卵的受精比例为1:500~1000mL。

8.根据权利要求7所述的石斑鱼精子冷冻保存液保存精子的使用方法，其特征在于：

所述步骤7）中，解冻是在水浴中进行。