[发明专利]一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法

权利要求书

1.一种悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：它包括以下操作步骤：

1)取2ml离心管，向离心管中加入700～1000μl去糖缓冲液，并加入5～15μlβ-巯基乙醇，于-20℃预冷5～10min；

2)取新鲜植物材料或经液氮速冻后-80℃保存的植物材料0.1～0.15g，加入0.1g交联聚乙烯基吡咯烷酮，在液氮冷冻条件下研磨成粉状，迅速转移至步骤1)的离心管中，温柔上下颠倒混匀后于冰上静置10min；

3)在4℃下按照3200×g离心5～10min；

4)彻底去除步骤3)离心所得上清液，向沉淀中加入700～1000μl65℃预热的细胞裂解液，涡旋1min，于55～65℃保温20～30min；

5)待步骤4)中的混合液冷却至室温后，按顺序加入细胞裂解液等体积的水饱和酚，1/80-1/50裂解液体积的pH调节剂，1/5裂解缓冲液体积的氯仿，剧烈震荡2min；

6)在4℃下按照16000×g离心5～10min；

7)将步骤6)离心所得上清液转入另一离心管，向管中加入上适量核酸沉淀剂，于-20℃静置30min以上，在4℃下按照16000×g离心10min后弃上清液，保留沉淀；

8)将步骤7)离心所得沉淀用体积分数为70～75％乙醇洗涤后室温风干，用DEPC处理水溶解后-80℃保存。

2.根据权利要求1所述悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：所述去糖缓冲液为：0.05M氯化钠、50mM pH 8.0的乙二胺四乙酸二钠、200mM pH 8.0的三羟甲基氨基甲烷。

3.根据权利要求1所述悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：使用碱性细胞裂解液裂解细胞，所述细胞裂解液为：30g/L十六烷基三甲基溴化铵、1.4M氯化钠、50～100mM pH 8.0的乙二胺四乙酸二钠、100～200mM pH 8.0的三羟甲基氨基甲烷以及20g/L聚乙烯吡咯烷酮 K30。

4.根据权利要求1所述悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：在细胞彻底裂解后，再使用pH调节剂调节混合液pH，使用的pH调节剂包括但不限于弱酸如冰醋酸、草酸。

5.根据权利要求1所述悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：使用的核酸沉淀剂包括但不 限于无水乙醇、异丙醇。

6.根据权利要求1所述悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：核酸沉淀时，使用的无水乙醇体积为上清体积的2～2.5倍；使用异丙醇体积为上清体积的0.8～1倍。

7.根据权利要求1所述悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：其适用于悬钩子属下的树莓、黑莓以及其他种或变种。

8.根据权利要求1所述悬钩子属植物总RNA的快速提取方法，其特征在于：其中植物材料包括但不限于果实、叶片及花。