[发明专利]一种抗犬细小病毒精制抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种抗犬细小病毒精制抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.制备犬细小病毒灭活疫苗；

S2.疫苗免疫健康犬只制备犬细小病毒高免血清；

S3.饱和硫酸铵溶液分步盐析分离S2制备的血清中的抗犬细小病毒免疫球蛋白；

S4.纯化：葡聚糖凝胶对步骤S3所提取的抗犬细小病毒免疫球蛋白进行脱盐；

S5.将步骤S4脱盐处理后的抗犬细小病毒免疫球蛋白超滤浓缩、过滤除菌、分装，即得。

2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1的方法为：以广东地区分离鉴定的犬细小病毒CPV-S5和CPV-1401为基础毒株，分别在F81细胞上扩大培养、小型切向流超滤浓缩后与水溶性佐剂MONTANIDE GEL按9：1的比例混合制备灭活疫苗。

3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2的方法为：选取5周龄CPV HI阴性的健康犬只，同时背部皮下多点接种犬细小病毒CPV-S5和CPV-1401两种灭活疫苗，25～30d后按照同样方法加强免疫；免疫后7～14d，颈动脉无菌采集CPV HI抗体效价不低于1：3072的犬血，静置、离心分离得到血清。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3饱和硫酸铵溶液分步盐析的步骤如下：

（a）将血清用磷酸缓冲液稀释，磁力搅拌下缓慢滴加预冷饱和硫酸铵溶液至终浓度为15～25%，搅拌10～30min，0～10℃静置0.5～2h后，5000～8000r/min离心20～40min，弃沉淀；

（b）向步骤（a）得到的上清溶液中，磁力搅拌下缓慢滴加预冷饱和硫酸铵溶液至终浓度40～60%，0～4℃静置0.5～2h后，5000～8000r/min离心2～40min，弃上清，收集沉淀；

（c）向步骤（b）所得沉淀中加入原血清两倍体积的PBS溶解，磁力搅拌器下缓慢滴加预冷饱和AS溶液至终浓度25%～35%，0～4℃静置0.5～2h，5000～8000r/min离心20～40 min，弃上清，收集沉淀；

（d）重复步骤（c）两次。

5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S4所述纯化的方法为采用Sephadex™ G-25 预装凝胶柱，利用葡聚糖凝胶对步骤S3所提取的抗犬细小病毒免疫球蛋白进行脱盐纯化。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S5所述超滤浓缩为使用小型切向流超滤浓缩。

7.根据权利要求1～6任一所述方法制备得到的抗犬细小病毒精制抗体。

8. 根据权利要求7所述抗犬细小病毒精制抗体，其特征在于，包括抗犬细小病毒免疫球蛋白；其中，所述抗犬细小病毒免疫球蛋白的含量＞130 mg/mL，CPV HI抗体效价不低于1：10240。

9.权利要求7所述抗犬细小病毒精制抗体在作为或制备犬细小病毒病的预防和/或治疗药物方面的应用，或在作为或制备预防和/或治疗犬细小病毒病毒性肠炎的药物或试剂方面的应用。

10.权利要求7所述抗犬细小病毒精制抗体在作为或制备可增加患病犬机体免疫力和抵抗力的药物中的应用，所述患病犬是指感染了犬细小病毒的犬。