[发明专利]CpG‑ODN在MUC1融合蛋白抗肿瘤中的应用

说明书

技术领域：

本发明提供一种CpG-ODN在MUC1融合蛋白抗肿瘤中的应用，涉及CpG-ODN 2006序列作为免疫佐剂在重组MUC1-MBP抗肿瘤中的医用用途，属于免疫学治疗领域。

背景技术：

CpG-ODN是人工合成的含有非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)的寡脱氧核苷酸(ODN)，可模拟细菌DNA刺激B细胞、树突状细胞活化，间接激活NK和T细胞等多种免疫效应细胞，增强抗原提呈细胞的加工和提呈，诱导Th1型免疫应答，产生较强的体液免疫和细胞免疫应答，可用于肿瘤治疗、过敏性疾病、感染性疾病、免疫功能低下者。目前公认的对人免疫刺激活性最强是CpG-ODN 2006。国外已经对CpG-ODN 2006进行了多项临床试验，包括对黑色素瘤、肺小细胞癌、皮肤T细胞淋巴瘤，证实是高效低毒的新型免疫佐剂。国内沃森生物将CpG-ODN作为乙型肝炎疫苗佐剂，目前正在进行临床III期实验，而国内目前尚未发现用于肿瘤疫苗佐剂的报道。

MUC1是Mucins粘蛋白家族的重要成员，存在于正常腺管上皮细胞及其来源的肿瘤细胞表面，由多肽核芯(核芯肽)和侧枝糖链构成。由于正常组织MUC1与肿瘤组织不同，使其成为免疫细胞攻击的靶点。经反复动物实验以及部分人体实验研究证实，MUC1是肿瘤疫苗研制的有效靶点。目前以MUC1为靶点研制的肿瘤疫苗，49个处于临床试验阶段，其中，TG4010和Tecemotide也已经完成III期临床并取得良好的结果。本研究组长期以来以MUC1为靶点，首次通过基因工程技术将MUC1基因与大肠杆菌麦芽糖结合蛋白偶联制成重组MUC1-MBP融合蛋白。研究发现重组MUC1-MBP融合蛋白单独免疫小鼠，很难产生强烈的细胞免疫应答，而与CpG-ODN 2006联合免疫，既能产生特异性体液免疫应答，又能产生较强的细胞免疫应答，发挥良好的抗肿瘤效果。

发明内容：

本发明提供一种CpG-ODN在MUC1融合蛋白抗肿瘤中的应用，用于人类治疗或预防肿瘤。

本发明公开的CpG-ODN在MUC1融合蛋白抗肿瘤中的应用，其中，

所述的CpG-ODN 2006序列是：5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3'，也称CpG-ODN 7909，是一种非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸为核心的序列；CpG-ODN 2006序列不仅能促进重组MUC1-MBP融合蛋白诱导特异性体液免疫应答，而且能促进诱导特异性细胞免疫应答，具有良好的抗肿瘤作用，二者联合可作为疫苗用于表达MUC1的肿瘤包括腺癌、血液肿瘤等治疗或预防的用途。

本发明CPG-ODN 2006与重组MUC1-MBP联合适用于下述医疗用途：

1.CPG-ODN 2006作为佐剂与重组MUC1-MBP联合，作为治疗性疫苗治疗癌症包括表达MUC1的腺癌、肝癌、血液肿瘤等。

2.CPG-ODN 2006作为佐剂与重组MUC1-MBP联合，作为预防性癌症疫苗预防各种癌症，包括表达MUC1的腺癌、肝癌、血液肿瘤等。

本发明所述的CPG-ODN 2006作为佐剂与重组MUC1-MBP联合的制备工艺，包括以下步骤：

1、重组MUC1-MBP融合蛋白的制备，参见重组人MUC1-MBP融合蛋白抗肿瘤疫苗及生产工艺，(专利号ZL 03111045.2)；

2、重组MUC1-MBP融合蛋白以40-160μg/ml溶于生理盐水中；

3、将CPG-ODN 2006以40-160μg/ml浓度溶于生里盐水中；

4、将上述CPG-ODN 2006与重组MUC1-MBP融合蛋白按照等比例进行混合，经0.22μm滤膜过滤除菌。

本发明的积极效果在于：利用CPG-ODN 2006与MUC1-MBP协同促进产生MUC1特异性Th1应答特性，提示CPG-ODN 2006具有诱导MUC1-MBP产生特异性细胞免疫应答的作用，CpG-ODN 2006序列促进重组MUC1-MBP诱导T细胞免疫应答，具有显著的抗肿瘤疗效。CpG-ODN 2006序列可作为重组MUC1-MBP疫苗的佐剂，可作为癌症疫苗开发利用，用于人类治疗或预防肿瘤。

附图说明

图1为本发明重组MUC-MBP的SDS-PAGE分析电泳图；

图2为本发明重组MUC1-MBP单独免疫诱导的抗肿瘤作用图；

图3为本发明CpG ODN 2006与MUC1-MBP对小鼠生存期影响图。

具体实施方式