[发明专利]单组分TMB底物浓缩液及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了单组分TMB底物浓缩液及其制备方法与应用，每1ml所述浓缩液中：甘油0.1ml,聚乙烯甘醇2000(PEG2000)0.1g,二甲基亚砜(DMSO)0.1ml,TMB 0.013g,β‑环糊精0.02g,乙二胺四乙酸(EDTA)0.0024g,柠檬水0.02g,过氧化氢0.22％，已丙醇0.05ml,反丁烯二酸0.01g,其余为去离子水，所述浓缩液pH值为3.6±0.2，通过混合方式获得，具有极高的稳定性和TMB的溶解度。

技术领域

本发明涉及分子技术领域，尤其是单组分TMB底物浓缩液及其制备方法与应用。

背景技术

TMB的中文名称为3,3’,5,5’–四甲基对二氨基联苯，是一种新型安全的色原试剂；TMB已在逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物，应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测等领域；尤其是在临床生化检验方面，TMB作为过氧化酶的新底物，在酶免疫分析法(EIA)和酶联免疫吸附检验法(ELISA)中获得了广泛的应用。TMB作为与过氧化物酶一起进行酶联免疫测定的底物，其作用机理在几十年前就已经确立，阻止TMB被氧化以及形成沉淀的方法也早就得到了阐明。

随着在酶联抗体检测和免疫诊疗中以TMB为底物、辣根过氧化物酶(HRP)为活性物的免疫测定中TMB被得到广泛应用，TMB已成为广泛接受的良好的过氧化物底物酶，TMB的需求量也与日剧增。然而使用浓度的TMB底物浓度较小，体积庞大，为TMB的运输造成极大不便。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种单组分TMB底物浓缩液。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述单组分TMB底物浓缩液的制备方法。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述单组分TMB底物浓缩液的应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种单组分TMB底物浓缩液，每1ml浓缩液中：甘油0.1ml,聚乙烯甘醇2000(PEG2000)0.1g,二甲基亚砜(DMSO)0.1ml,TMB 0.013g,β-环糊精0.02g,乙二胺四乙酸(EDTA)0.0024g,柠檬水0.02g,过氧化氢0.22％，已丙醇0.05ml,反丁烯二酸0.01g,其余为去离子水，所述浓缩液pH值为3.6±0.2。

优选的，上述单组分TMB底物浓缩液，所述去离子水为电阻18MΩ的去离子水。

上述单组分TMB底物浓缩液为浓缩20倍的TMB溶液。

上述单组分TMB底物浓缩液的制备方法，具体步骤如下：

(1)按组方量准备如下组分：甘油、聚乙烯甘醇2000、二甲基亚砜、TMB、β-环糊精、乙二胺四乙酸、柠檬酸、过氧化氢、异丙醇、反丁烯二酸和去离子水；

(2)配置β-环糊精：将β-环糊精加入部分去离子水中，搅拌至完全溶解；

(3)继续加入除DMSO、TMB和H₂O₂外的其他全部剩余试剂；

(4)在不断搅拌下将TMB加入到DMSO中；

(5)将步骤(4)中溶液、H₂O₂与步骤(3)中溶液混合，最终混合溶液包含组方中所有的化学试剂，调节混合溶液的pH值至3.6±0.2；

(6)继续加入剩余去离子水进行补足，所得到的TMB浓缩液在40-50℃条件下搅拌直至所有化学物质全部溶解，即得。

优选的，上述单组分TMB底物浓缩液的制备方法，所述步骤(5)中用于条件pH值的溶液为盐酸溶液。

上述单组分TMB底物浓缩液在检测辣根过氧化物酶方面的应用。