[发明专利]一种异硫氰酸荧光素修饰的负载葡萄糖氧化酶的聚多巴胺复合材料的制备及应用

权利要求书

1.一种异硫氰酸荧光素修饰的负载葡萄糖氧化酶的聚多巴胺复合材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、PDA-FITC复合材料的制备：在装有乙醇水溶液的烧杯中加入氨水，调节pH至8.4-8.6，得混合溶液，然后加入多巴胺盐酸盐和异硫氰酸荧光素FITC，置于30℃水浴中搅拌28-30h，得悬浮液，于悬浮液中加入HCl稀溶液，调节pH至4.8-5.0，再置于离心机中离心，得下层沉淀，将离心好的下层沉淀分散到蒸馏水中，即为PDA-FITC复合材料水溶液，其中，氨水与乙醇水溶液的体积比为1：(48-52)，多巴胺盐酸盐和异硫氰酸荧光素FITC的质量比为(50-200):(2.5-10)，多巴胺盐酸盐在乙醇水溶液中的固含量为(1.5-7)mg/mL，蒸馏水与乙醇水溶液的体积比为1：2；

B、PDA-FITC-GOx复合材料的制备：向步骤A制备的PDA-FITC复合材料水溶液中加入PBS缓冲液，葡萄糖氧化酶GOx和蒸馏水，恒温振荡反应24h，再加入HCl稀溶液调节pH至4.8-5.0，将调好pH的悬浮液用离心机离心得下层沉淀，将离心好的下层沉淀再分散到蒸馏水中，加入NaOH稀溶液调节pH至7.3-7.5，即为PDA-FITC-GOx复合材料水溶液；其中，PDA-FITC复合材料水溶液、PBS缓冲液、步骤B中出现的全部蒸馏水的体积比为5:1:14，第一次蒸馏水与第二次蒸馏水的体积比为4:10，葡萄糖氧化酶GOx在PDA-FITC复合材料水溶液中的固含量为(0.5-2)mg/mL。

2.根据权利要求1所述的一种异硫氰酸荧光素修饰的负载葡萄糖氧化酶的聚多巴胺复合材料的制备方法，其特征在于：所述乙醇水溶液的体积百分比浓度为25％-35％。

3.根据权利要求1所述的一种异硫氰酸荧光素修饰的负载葡萄糖氧化酶的聚多巴胺复合材料的制备方法，其特征在于：所述氨水的质量百分比浓度为28％，HCl稀溶液的浓度为1mol/L，NaOH稀溶液的浓度为1mol/L。

4.根据权利要求1所述的一种异硫氰酸荧光素修饰的负载葡萄糖氧化酶的聚多巴胺复合材料的制备方法，其特征在于：所述PBS缓冲液的pH为6.3-6.6。

5.根据权利要求1所述的一种异硫氰酸荧光素修饰的负载葡萄糖氧化酶的聚多巴胺复合材料的制备方法，其特征在于：所述恒温为25℃。

6.采用权利要求1-5任意一项所述的制备方法得到的PDA-FITC-GOx复合材料。

7.权利要求6所述的PDA-FITC-GOx复合材料在检测葡萄糖浓度方面的应用。

8.根据权利要求7所述的PDA-FITC-GOx复合材料在检测葡萄糖浓度方面的应用，其特征在于，采用下述方法步骤：

取一系列5ml具塞刻度比色管，分别向每支比色管中加入100μL上述制备的PDA-FITC-GOx复合材料水溶液，再分别向每支比色管中依次加入0-80μM不同浓度的葡萄糖溶液，每支比色管中加入蒸馏水稀释至1mL，恒温振荡反应1h后，置于荧光比色皿中用荧光光谱仪在激发波长470nm、发射波长523nm时测定荧光强度；以葡萄糖浓度为横坐标，反应液在523nm波长处的荧光强度值为纵坐标，在直角坐标系中作图，得到葡萄糖浓度与荧光强度之间的线性关系图，根据它们之间的这种线性关系以检测葡萄糖的浓度。

9.根据权利要求7所述的PDA-FITC-GOx复合材料在检测葡萄糖浓度方面的应用，其特征在于，所述步骤具体如下：

A、PDA-FITC复合材料的制备：在30mL乙醇水溶液中加入0.6mL氨水调节pH至8.4-8.6，之后加入50～200mg多巴胺盐酸盐和2.5～10mg异硫氰酸荧光素FITC，再置于30℃水浴中搅拌30h后加入HCl稀溶液调节pH至5.0，将调好pH的悬浮液用离心机离心得下层沉淀，将离心好的下层沉淀再分散到60mL蒸馏水中，即得PDA-FITC复合材料水溶液；

B、PDA-FITC-GOx复合材料的制备：向5mL步骤A制备的PDA-FITC复合材料水溶液中加入1mL pH为6.5的PBS缓冲液，5-40mg的葡萄糖氧化酶GOx和4mL蒸馏水，恒温振荡反应24h，加入HCl稀溶液调节pH至4.8-5.2，将调好pH的溶液用离心机离心得下层沉淀，将离心好的下层沉淀再分散到10mL蒸馏水中，加入NaOH稀溶液调节pH至7.4，即得PDA-FITC-GOx复合材料水溶液；

C、葡萄糖的检测：取11支5ml具塞刻度比色管，分别向每支比色管中加入100μL步骤B制备的PDA-FITC-GOx复合材料水溶液，再分别向每支比色管中依次加入0μL、5μL、10μL、15μL、20μL、3μL、40μL、50μL、60μL、70μL、80μL浓度为1×10^-3M的葡萄糖溶液，每支比色管中加入蒸馏水稀释至1mL，恒温振荡反应1h后，置于荧光比色皿中用荧光光谱仪在激发波长470nm、发射波长523nm时测定荧光强度；以葡萄糖浓度为横坐标，反应液在523nm波长处的荧光强度值为纵坐标，在直角坐标系中作图，得到葡萄糖浓度与荧光强度之间的线性关系图，根据它们之间的这种线性关系以检测葡萄糖的浓度。