[发明专利]一种人胚胎干细胞分化专用的无血清培养基

说明书

本发明提供了一种商业用的人胚胎干细胞无血清分化培养基，由以下成分构成：L‑谷氨酰胺2mmol/L、L丙酮酸钠0.2mmol/L、转铁蛋白6.5mg/L、亚硒酸钠30mg/L和人表皮细胞生长因子:0.15mg/L，纤连蛋白:0.3mg/L，细胞活性促进肽如SEQ ID NO：1或2所示，用DMEM/F12培养基进行配置。该分化培养基中由于不含有动物来源的血清，因此可以控制感染风险；在分化培养基中加入了特异性促进干细胞分化活性的小肽，使得细胞生长以及分化速度显著提高；制备得到的心肌细胞的生物学特性保持不变；经过试验验证的心肌细胞在保持了较长的时间内的生物学特性不发生改变。而且细胞的分化效率以及成活率都较高。

技术领域

本发明涉及干细胞培养基技术领域，具体涉及一种胚胎干细胞无血清培养基。

背景技术

胚胎干细胞(embryonic stem cell，ESCs，简称ES、EK或ESC细胞。)胚胎干细胞是早期胚胎(原肠胚期之前)或原始性腺中分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。胚胎干细胞研究在美国一直是一个颇具争议的领域，支持者认为这项研究有助于根治很多疑难杂症，因为胚胎干细胞可以分化成多种功能的APSC多能细胞，被认为是一种挽救生命的慈善行为，是科学进步的表现。而反对者则认为，进行胚胎干细胞研究就必须破坏胚胎，而胚胎是人尚未成形时在子宫的生命形式。由胚胎来源的原始(未分化)细胞，它们具有分化成为众多特异细胞类型的潜能。

胚胎干细胞最诱人的前景和用途是生产组织和细胞，用于“细胞疗法”，为细胞移植提供无免疫原性的材料。任何涉及丧失正常细胞的疾病，都可以通过移植由胚胎干细胞分化而来的特异组织细胞来治疗。如用神经细胞治疗神经退行性疾病(帕金森病、亨廷顿舞蹈症、阿尔茨海默病等)，用胰岛细胞治疗糖尿病，用心肌细胞修复坏死的心肌等。胚胎干细胞还是基因治疗最理想的靶细胞。这里的基因治疗是指用遗传改造过的人体细胞直接移植或输入病人体内，达到控制和治愈疾病的目的。这种遗传改造包括纠正病人体内存在的基因突变，或使所需基因信息传递到某些特定类型细胞。

CN 100465268 C中公开了一种人胚胎干细胞的培养方法及其专用培养基。该培养基配方为：N25-30mL，B2710-60mL，谷氨酰胺0.0146-0.73g，β-巯基乙醇5-10μl，非必需氨基酸中的一种或几种共计：3-30mL，碱性成纤维细胞生长因子20-200mg，小牛血清白蛋白0.2-0.8g；用DMEM/F12定容至1000mL，pH7.2-7.8。该培养基成分确定，且无任何动物来源的成分，使用安全性高。该方法并不能特异性的针对分化为心肌细胞的用途。

CN 102994446 B中公开了一种诱导胚胎干细胞定向分化为心肌细胞的诱导分化培养基，其特征在于，诱导剂由丹酚酸B和人参皂苷Rgl组成；所述诱导分化培养基通过以下方法制得：诱导剂加入用于胚胎干细胞培养的分化培养基；其中，所述诱导剂中的丹酚酸B在所述诱导分化培养基中的浓度为104-105M，人参皂苷Rgl在所述诱导分化培养基中的浓度为104-105M；所述用于胚胎干细胞培养的分化培养基由如下成分配制而成：GMEM培养基，胎牛血清，非必须氨基酸，100mM的丙酮酸钠水溶液和10W的二巯基乙醇水溶液，其中GMEM培养基：胎牛血清：非必需氨基酸：丙酮酸钠水溶液：二巯基乙醇水溶液的体积比＝77.9:20:1:1:0.1。诱导剂的使用浓度过高，对于生产以及细胞的安全性都有很严重的影响。