[发明专利]一种煤层厌氧产甲烷菌群的菌种保藏方法

说明书

本发明属微生物工程技术领域，为解决现有菌种保藏方法无法满足煤层气生成的产甲烷菌群的菌种短期和长期保藏，且保持菌种高产甲烷气的活性，提供一种煤层厌氧产甲烷菌群的菌种保藏方法。步骤为：筛选待保藏菌种，加入到5ml的厌氧管中，然后加入等体积的灭菌甘油/除氧L‑半胱氨酸溶液，将其混匀后保藏；长期保藏：无烟煤块煤、保藏营养液、L‑半胱氨酸及刃天青、菌液按一定比例混合后室温保藏，模拟煤层环境条件，保藏的产甲烷菌群始终保持较高的活性及较稳定的菌群结构，以得到较理想的甲烷产量。不需要超低温设备等，不需特殊设备，方便快捷，适合不同量菌种长短期保藏，经济方便，为生产、试验节约成本。

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一种煤层厌氧产甲烷菌群的菌种保藏方法。

背景技术

菌种作为从事微生物学研究的基本材料，是国家的重要资源。特别是对于利用微生物进行相关的生产，更是离不开菌种。故菌种保藏在微生物学研究及实际应用中必不可少。

目前，菌种保藏的方法主要有：甘油冷冻保藏法、液体石蜡保藏法、真空冷冻干燥保藏法、冷冻保藏法及载体保藏法等。生物煤层气的产生是由多种厌氧混合菌共同作用代谢煤基质产生的，故需保藏的作用混合菌群结构相对稳定性非常重要。

煤层气(coal bed methane, CBM)是储存在煤层中、自发产生的一种非常规天然气，其主要成分为甲烷，并含有少量的CO、CO₂、N₂、H₂S、H₂等气体，以吸附态为主、游离态为辅储存在煤层基质表面或空隙中，是一种非常优质的清洁能源。目前，煤层气的开发及利用都受到了世界各国的重视，我国也大力提倡开发及利用煤层气。煤层气可分为热成因煤层气和生物成因煤层气。生物成因煤层气又可分为原生生物成因煤层气和次生生物成因煤层气，原生生物成因煤层气形成于煤化作用的早期阶段，难于大量保存，目前探测到的生物成因煤层气多为次生生物煤层气，次生生物煤层气是由产甲烷菌等厌氧菌（包括细菌及古菌等）代谢煤或煤层物质产生的以甲烷为主要成分的气体。目前，次生生物煤层气的基础地质研究及勘探开发已经成为煤层气地质界的研究热点。在微生物工程技术领域，实验模拟次生生物煤层气的产生被广泛应用于研究生物成因煤层气生成的机理中。大量煤层本源菌群的生物气生成模拟实验都证实了煤层气井中存在完整的产甲烷菌群生态系统。但煤层中贫瘠的营养条件限制了它们的活性，直接保藏煤层中的产甲烷菌群，其用于后续的生物产气模拟实验，产气效果不理想。现有的生物产气研究实验大都建立在对本源产甲烷菌群的富集驯化试验基础之上，即煤层本源菌群经厌氧富集驯化培养后，利用培养到的本源微生物进行生物产气模拟实验。如何对富集驯化到的厌氧产甲烷菌群进行菌种保藏对于后续模拟产气实验中研究生物成因煤层气的产气机理及获得较稳定的高甲烷产量具有重要意义。

发明内容

本发明为了解决现有菌种保藏方法无法满足煤层气生成的产甲烷菌群的菌种短期和长期保藏，且能够保持菌种高产甲烷气的活性，提供了一种煤层厌氧产甲烷菌群的菌种保藏方法。

本发明由如下技术方案实现的：一种煤层厌氧产甲烷菌群的菌种保藏方法，包括如下步骤：

（1）筛选待保藏菌种：在煤层气产气井排水口采集煤层产出水，对产出水进行产甲烷菌群富集驯化培养，甲烷生成量达到30%以上的菌种培养液作为待保藏菌液；

（2）短期保藏：步骤（1）中获得的待保藏菌液加入到5ml的厌氧管中，然后加入等体积的灭菌甘油/除氧L-半胱氨酸溶液，将其混匀后保藏；