[发明专利]一种基于OMEGA水样DNA试剂盒的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种基于OMEGA水样DNA试剂盒的提取方法。

背景技术

目前，在实验室中提取水样中微生物DNA，多是直接采用试剂盒来进行操作。OMEGA水样DNA提取试剂盒（E.Z.N.A.TM Water DNA Kit）是实验室较为常用的一种试剂盒，它的前期处理方法是将水样中微生物过滤收集在0.22µm或0.45µm的滤膜上，经切碎后在离心管中与玻璃珠和试剂混合，涡旋振荡3分钟进行反应。存在的问题是，水样中微生物经0.22µm或0.45µm滤膜过滤收集的过程非常缓慢，且滤膜还需人为地尽可能切碎，操作起来耗时费力，并且需加入更多的试剂才能与滤膜、玻璃珠共同涡旋振荡进行反应，造成试剂浪费。

发明内容

本发明为了解决现有OMEGA水样DNA提取试剂盒（E.Z.N.A.TM Water DNA Kit）的前期处理方法操作繁琐、费时耗力、浪费试剂等问题，提供了一种基于OMEGA水样DNA试剂盒的提取方法。

本发明由如下技术方案实现的：一种基于OMEGA水样DNA试剂盒的提取方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）待测水样收集在5ml离心管内，控制离心机转速为6000g离心15min，混浊样品先采用滤纸过滤，然后将滤纸剪碎后放入离心管中进行离心，弃上清，收集沉淀备用；

（2）离心后留有沉淀的离心管内加入1.5ml SLX Buffer，在漩涡混合仪上以最大速度振荡混合1min，彻底混匀样品；

（3）混匀样品后80℃水浴10min，期间混悬样品2-3次；

（4）加入0.5ml SP2 Buffer，涡旋振荡30s，然后冰浴5min；

（5）依试剂盒说明书继续实验操作步骤。

采用本发明所述提取方法进行水样生物量DNA的提取，高速离心收集，混浊水样可预先经滤纸过滤，无需加入玻璃珠，所提取的DNA浓度得到了很大的提高，比采用原试剂盒的提取方法所提取的DNA浓度提高了30.9%，且并不需要滤膜过滤，减少了试剂的使用量，且简化了微生物菌体收集过程，缩短了实验时间，节省了试剂用量，因此本发明所述提取方法对DNA的提取效率更高，更省时省力，也更经济合算。

附图说明

图1为所提取DNA的1%琼脂糖凝胶电泳图，M为1Kb DNA Ladder，1和2为采用原试剂盒提取方法提取的DNA样品，3和4为采用实施例2方法提取的DNA样品，5和6为采用实施例3方法提取的DNA样品；图2为图1中1样品的DNA检测结果图；图3为图1中2样品的DNA检测结果图；图4为图1中样品3的DNA检测结果图；图5为图1中样品4的DNA检测结果图；图6为图1中3样品5的DNA检测结果图；图7为图1中4品6的DNA检测结果图。

具体实施方式

以100mL产氢产酸菌群新鲜发酵培养液为实验样本，在OMEGA水样DNA提取试剂盒（E.Z.N.A.TM Water DNA Kit）方法的基础上，进行DNA提取，采用三种方法同时进行DNA提取实验，具体提取方法为：

实施例1：DNA提取具体操作方法为：按照OMEGA水样DNA提取试剂盒（E.Z.N.A.TM Water DNA Kit）的操作说明进行DNA提取实验：发酵培养液先用0.22µm或0.45µm滤膜过滤收集，混浊水样可预先经滤纸过滤，剪碎后放入离心管然后用0.22µm或0.45µm滤膜过滤收集，离心管中加入3ml SLX Buffer；以最高速涡旋振荡3min至样本均匀；70℃或90℃水浴10min，期间混合样品2~3次；加入1ml SP2 Buffer，涡旋振荡30s，冰浴5min；依试剂盒说明书继续实验操作步骤。

实施例2：（1）待测发酵培养液收集在5ml离心管内，控制离心机转速为6000g离心15min，混浊样品先采用滤纸过滤，然后将滤纸剪碎后放入离心管中进行离心，弃上清，收集沉淀备用；

（2）离心后留有沉淀的离心管内加入1.5ml SLX Buffer，在漩涡混合仪上以最大速度振荡混合1min，彻底混匀样品；

（3）混匀样品后80℃水浴10min，期间混悬样品2-3次；

（4）加入0.5ml SP2 Buffer，涡旋振荡30s，然后冰浴5min；

（5）依试剂盒说明书继续实验操作步骤。